铅对小鼠大脑皮质GABAA受体蛋白表达的影响.docVIP

  铅对小鼠大脑皮质 GABAA 受体蛋白表达的 影响# 牛瑞燕，孙子龙，王金明，张建海* 5 10 15 20 25 30 35 （山西农业大学动物科技学院，太谷 030801） 摘要：目的：为了研究铅对小鼠大脑皮质 GABAA 受体蛋白表达的影响。方法：20 只昆明 系小鼠随机分成对照组和铅组，饮水摄 300mg/L 醋酸铅 30 天，并取小鼠大脑皮质组织做成 组织切片，进行免疫组织化学实验。结果：与对照组相比，铅组小鼠大脑皮质 GABAA 受体 蛋白表达显著下降。结论：铅可通过降低皮质中 GABAA 受体的蛋白表达水平，从而发挥其 神经毒性作用。 关键词：临床兽医学；铅；小鼠；大脑皮质；GABAA；免疫组化 中图分类号：S856.9 Effects of lead on the protein expression of GABAA receptor in the cortex in mice NIU Ruiyan, SUN Zilong, WANG Jinming, ZHANG Jianhai (College of Animal Science and Veterinary Medicine, Shanxi Agricultural University, Taigu 030801) Abstract: In this paper, in order to investigate the effect of lead on the protein expression of GABAA receptor in cortex of mice, 20 Kunming mice were randmonly divided into the control group and lead exposure group. Mice were administrated with 300mg/L Pb(Ac)2 for 30 days. The results showed that lead significantly decreaded the expression of GABAA receptor in cortex, indicating a toxic effect on learning and memory. Key words: Clinical veterinary medicine; Lead; Mouse; Cerebral cortex; GABAA; Immunohistochemical 0 引言 [1] [2] 钙离子的生理特性，从而进入细胞中参与调节中枢神经系统发育，对学习记忆的突触模 型――长时程增强效应（LTP）形成中的神经递质、离子、酶造成影响。 铅是一种常见的 工业毒物和环境污染物，全世界平均每年向环境排放铅为500万吨。铅对人体健康、疾病和 生长发育的影响已引起人们越来越多的关注。铅可以通过胎盘向胎儿转运，并通过胎儿发育 尚不完善的血脑屏障，进入胎儿中枢神经系统，并对中枢神经系统的生长发育造成损害进而 影响胎儿出生后的学习记忆能力，也可以通过乳汁进入新生儿体内，造成婴幼儿铅负荷升高； 早期铅暴露还将影响儿童和青春期智发育，并且这些影响将持续到成年以后。 [3,4] 铅本身是一种毒性较低的物质，只有长期大量服用才会对人体造成伤害。本研究模拟污 染实际，建立了铅对鼠动态染毒的模型，采用免疫组化 SP 法染色手段，对铅引起的小鼠大 40 脑皮质 GABAA 受体蛋白表达引起的学习记忆力的变化进行了研究。 基金项目：教育部博士点项目（新教师基金）（20101403120003） 作者简介：牛瑞燕（1981-），女，副教授，主要从事环境兽医学方面的研究. niuruiyan2000@163.com -1- 1 材料与方法   1.1  试验动物 5 周龄性成熟的雌性小鼠 20 只，体重 20 克左右，由山西医科大学实验动物中心提供， 均为普通级动物。  45  1.2动物分组 将小鼠分为两组，每组 10 只，分别为对照组和试验组，分别给予蒸馏水和含 300mg/L 醋酸铅的蒸馏水，试验时间为 30 天。  1.3  试验方法 染毒结束后，乌拉坦麻醉，暴露胸腔，用 0.9%生理盐水灌流心脏，而后迅速取出整脑， 50 55 60 65 70 75 浸于提前配置好避光冷藏的 4%中性多聚甲醛中，24h 后用 PBS 静洗 24h（每隔 6 小时换一 次液体），再常规梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。将有脑组织的石蜡块制成 5μ m 的连续切片，60℃下烘烤 1h，烤好的切片每隔 5 张取一张用于做免疫组织化学染色。 免疫组化 SP 法染色程序 （1）脱蜡