RNA病毒质控物研究进展.pdfVIP

动物医学进展 。2013，34(1)：97一101 ProgressinVeterinaryMedicine RNA病毒质控物研究进展 温和心 ，龙英全 ，蒋荣华 ，盘宝进 (1．贵港 出人境检验检疫局，广西贵港 537100；2．灵长类 国家重点实验室 ，广西南宁 530000) 摘 要：RNA质控物是病毒分子生物学检测的关键因素，病毒颗粒和裸露的RNA片段 由于有生物传 染性，易降解而适合用作 RNA质控物。近年来发展起来的内含靶 RNA序列的盔 甲RNA 生物安全性高、 不易降解、能全程参与病毒核酸的提取和反应 ，是理想的RNA病毒质控物。 关键词：RNA病毒；盔甲RNA；质控物 中图分类号 ：$852．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2013)Ol一0097—05 随着分子生物学技术的迅速发展，以聚合酶链 HealthOrganization，WHO)应用含丙型肝炎病毒 反应技术 (po|ymerasechainreaction，PCR)为基础 (HCV)颗粒 的血清作为质控物 ，组织实验 室 间 的各种分子生物学诊断技术 ，因其具有特异性强、灵 HCV核酸扩增校准。ParaguisonRC等[2用分离 敏度高、线性范围广、重复性好、定量准确、方便快捷 到 的狂犬病病毒 (Rabiesvirus，RV)作为 阳性参照， 等优点，成为生物医学领域内最有价值的研究手段 ， 建立 RV的荧光定量 RT—PCR，用于检测唾液 中病 已经广泛地应用于临床标本的检测 。在核酸检测过 毒量的变化 。也有研究者用灭活疫苗作为阳性参照 程 中，分子生物学检测方法的准确性容易受到以下 物 ，如用 口蹄疫疫苗作为阳性标准建立检测 口蹄疫 多种因素的影响 ]：①仪器控温程序不正确，或不能 核酸的RT—PCR和 RT—LAMP方法。在检测体系 精确控温 ；②逆转录酶和 Taq酶活性低 、反应液质 中加入类似生物质作为 内部质控物 ，如大肠埃希菌 量差 ，引物 、探针设计不合理；③核酸模板提取量少 ， 噬菌体 MS-2的是包膜蛋白包裹结构 RNA结构 ，与 检测的目的片段降解 ，残留的乙醇和酚量过大，样 品 RNA病毒结构相似 ，但 MS．2无致病性 ，是 RNA病 杂质去除不干净 ，如粪便标本 中的胆盐 ，血液中的血 毒检测较为理想 的内部质控物质L3]。此外 ，也可应 用对检测无干扰的同属病毒作为内部质控物，如戊 红素及尿中的尿素会对 PCR反应产生抑制作用；④ 型肝炎病毒 (HEV)和戊型肝炎病毒 同属杯状病毒 病毒核酸序列发生变异；⑤实验操作人员的操作失 属 ，都是单股正链 RNA病毒，两者也具有较相似的 误。因此 ，在做核酸特别是 RNA扩增实验时，需要 理化性质 ，但感染 的宿主不 同，如有人研究戊型肝 有严格的质量控制措施 ，即需要有特定的质控物 ，同 炎病毒的RT—PCR检测方法时，应用猫杯状病毒作 时，要对核酸进行定量测定 ，通常还须有核酸标准 为 内部质控物，取得很好 的结果[4]。因而此类生物 物 。质控物和标准物须具有以下特点l2]：①容易制 质可作为的质控物来监控病毒颗粒裂解效率和核酸 备 ；②在贮存和使用过程 中具有足够的稳定性 ；③无 提取等整个检测过程 。但是应用该类病毒作为内标 生物传染性；④能监测检测的全过程 ，结果可靠 。目 质控物用于 RT—