片球菌素pediocin PA-1基因在大肠埃希菌中的融合表达.pdfVIP

中国微生态学杂志 2009年 l1月第21卷第 l1期 961 文章编号：1005-376X(2009)11-0961-04 【论 著】 片球菌素 pediocinPA一1基因在大肠埃希菌中的融合表达 马淑霞’r，昊庆田 ，孙红娇 ，李春江 ，李丽秋 ，王眷敏 ，任继秋 ，杨景云 (1．佳木斯大学基础医学院微生物教研室，黑龙江佳木斯 154007；2．佳木斯大学 儿童神经康复实验室，黑龙 江 佳木斯 154007) 【摘要】 目的 构建编码细菌素pedioeinPA一1基因片段的原核表达载体，诱导表达 ，鉴定表达产物。方法重 组DNA技术构建原核表达载体 pET32一papA，IPTG诱导表达，用金属亲和层析纯化，并通过 SDS—PAGE与 Western blot对表达的重组蛋白进行鉴定。结果 双酶切和测序鉴定显示 papA片段插入正确，诱导表达后获得分子量为 19kD的融合蛋白，表达量为25％，用金属亲和层析的方法获得纯化的片球菌素pediocinPA一1。结论 papA基因片 段编码的蛋白质能在原核细胞中正确表达 ，为下一步研究该功能域的生物活性奠定了基础。 【关键词】 乳酸片球菌 ；片球菌素PA1；融合蛋 白；原核表达 【中图分类号】R392．11 【文献标识码】A FusionexpressionofpediocinPA-1geneinEscherichiacoli MAShu—xia ，WUQing．dan，SUNHong-jiao，LIChun-jiang，LILi—qiu，WANGChun-min，RENJi— qiu ，YANGJing—yun ． (1．DepartmentofMicroecology，JiamusiUniversity，Jiamusi154007，China；2．LaboratoryofChildrenSRehabilitation，胁 一 musiUniversity，Jiamusi154007，China) A【bstract】 0bjective ToconstructprokaryoticexpressionvectorofpedioeinPA一1genefragmentinducetheex- pression，andidentifytheexpressedp~ uct．M ethod TheexpressionvectorpET32-papA wa$constructedbyrecombinant DNA technology．Th eexpressedproteinwaspurifiedthroughmetalaffinityChromatographynadidentifiedbySDS nadWestern blottingafterinductionbyIPTG．Result pET32-papAwasconstructedsuccessfullyandthecodingregionWas insertedintothevectorcorrectly．Anewproteinband，about20×10 ，wasobservedbySDS—PAGEna alysisafterinduction byIPTG na dWestern blotting．Theexpressedproduct．containedabout25％ offusionprotein．Conclusion PapA protein couldbeexpressedinE coliexpressionsystem．whichcouldprovidefoundationforfurtherstudiesonpedioeinPA一1． 【Keywords】 Pediococcusacidilactici；PediocinPA一1；Fusionprotein；Prokaryoticexpression 细菌素是由某些细菌在代谢过程中通过核糖体