水稻中与白叶枯病菌hrf1基因同源序列克隆及功能分析.pdfVIP

25(4)312—315 中国生物 防治 ChineseJournalofBiologicalControl 2009年 l1月 水稻中与白叶枯病菌 hrfl基因同源 序列克隆及功能分析 郭玲，邵敏 (南京农业大学农业部病虫监测与治理重点开放实验室，南京 210095) 摘要：利用PCR技术从粳稻R109中克隆到与he1同源的序列，命名为hpfr1，与h~l基因的同 源性为92％。推导的氨基酸 同源性为74．8％。hpfr1基因连接到含 1_7启动子的高表达载体 pET30a(+)上构建重组质粒 pHOSJ4，并转化 宿主菌 BL21(DE3)产 生表达 菌株 B1221(DE3)／ pHOSJ4。hpfr1与 he1基因在起始密码子ATG至225个碱基处完全相同。将ATG至225碱基 的序列克隆，并构建表达载体 pHOSJ4—225，表达产物注射烟草能引起过敏反应。BI21(DE3)／ pHOSJ4和 BI21(DE3)／pHOSJ4．225的蛋 白抽提物诱 导烟草抗烟草花叶病毒病均达极显著水 平，浓度为60~l／rnl时防效最显著，分别为96．35％、95．4％，与harpinxoo防效(95．9％)相近。 关 键 词 ：h~l基因；hpfrl基因；过敏反应；烟草花叶病毒；抗性 中图分类号：$435．111．47；Q785／6 文献标识码：A 文章编号：1005—9261(2009)04—0312—04 CloningandBioactivitiesofhpfr1Gene，aHomo}ogiealSequenceofhrflGene ofXanthomonasoryzaepv．oryzaefrom Oryzazativa GUO Ling，SHAO Min (KeyLaboratoryofMonitoringandManagementofPlantDiseasesandInsects，MinistryofAgriculture， NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095，China) Abstract：Hpfr1，ahomologicalsequenceofh~l，wasclonedfromajaponicacultivarR109byPCR analysis．Thehomologiesofhpfi1comparedwith are92％andinferredhomologiesofaminoacid from 1comparedwiththatfrom h~1are74．8％．HpfrIgenewasligatedintoexpressionvector pET30a(+)whichhas，I7promotertoconstructrecombinantplasmidpHOSJ4．Thefunctionofthispro． teinissimilartoharpinx。。andcausesHRinnon—hostplant．Theseguencesofhpfr1andhOq arethe samefrom theinitiationcodeATG to225bp site．Thesequencesfrom ATG to225bp sitewerecloned andconsturctedexpressionvectorpHOSJ4—225．ThecruderecombinantproteinsalsocauseHR inXanthi tobacco．SpraysoftheproteinsontoXanthitobaccoinducetheresistanceoftobaccotoTMVremarkably． ThecontrastanalysesofLSD indicatethattheproteinextractionofBL21(DE3)／pHOSJ4andBL21 (DE3)／pHOSJ4—225candramaticallyenhancetobaccoresistancetoTMV． Keywords：h~1gene；hpfr1gene；hypersensitiveresponse；tobaccomosaic