4株邻苯二甲酸二丁酯降解菌的分离鉴定及其相关降解基因的克隆.pdfVIP

环 境 科 学 Vo1．30，No．9 Sep．，2009 ENVIRONMENTALSCIENCE 4株邻苯二甲酸二丁酯降解茵的分离鉴定及其相关降 解基因的克隆 ， 吴学玲 ，金德才 ，赵维 良 ，梁任星 ，李乾 ，杨宇 ，邱冠周 (1．中南大学资源加工与生物工程学院，长沙 410083；2．东吴大学微生物学系，台北，中国台湾) 摘要：从土壤中分离纯化出4株能降解邻苯二甲酸二丁酯(DBP)的菌株，分别命名为JDC．1、JDC．8、JDC一9、JDC一12，并对其进行 了形态学 、生理生化及分子生物学鉴定 ．菌株革兰氏染色阳性 ，16SrDNA序列分析显示 4株菌均与节杆菌属 (Arthrobactersp．)有 99％以上的序列相似性 ，初步判断这4株菌为 Arthrobactersp．．通过PCR扩增及克隆，均获得 了1个约900bp的DNA片段 ，测序 结果显示该片段与 Arthrobacterkeyseri的邻苯二甲酸3，4．双加氧酶基因的核苷酸序列相似性为96％以上 ．对 4株菌的最适生长 条件及对 DBP的降解能力进行 了分析 ，结果显示 ，4株菌的最适生长条件为 pH7．0～8．5，温度 3O～35℃．以DBP作为 目标测试 物 ，在适宜条件下测试 了4株菌的降解能力，显示这 4株菌均为高效降解菌，效率最高的JDC．1能在 28h内将 500mg／L的DBP 降解完全 ，最慢 的JDC8经 40h能将 500mg／L的DBP降解完全 ，本研究对于 DBP降解机制的研究及微生物资源 的开发都具有 重要意义 ． 关键词 ：邻苯二 甲酸二丁酯 ；节杆菌属 ；分离；鉴定；生物降解 ；邻苯二甲酸双加氧酶 中图分类号 ：X172 文献标识码 ：A 文章编号 ：0250．3301(2009)09．2722—06 IsolationandIdentificationofFourDBP—DegradingStrainsandMolecularCloning oftheDegradationGenes WUXue—ling，JINDe—cai，CHAOWei·liang’，LIANGRen—xing，LIQian，‘YANGYu，QIUGuan-zhou (1．SchoolofResourcesProcessingandBioengineering，CentralSouthUniversity，Changsha410083，China；2．DepartmentofMicrobiology， SoochowUniversity，Taipei，Taiwan，China) Abstract：Fourdi—butyl—phthalate(DBP)一degradingbacterialstrains，JDC一1，JDC一8，JDC一9andJDC一12，wereisolatedfromsoil．Thestrains weregram positive．The16SrRNA sequenceanalysisrevealedthatthefourstrainshadsimilaritiesof99％ withArthrobactersp．．Accordingto themorphologic，physiobiochemicalcharacteristicsandtheanalysisoftheir16SrRNA，allthefourstrainswereidentifiedasArthrobactersp．． A900bpDNAfragmentwasobtainedfrom thefourstrainsbyPCR amplifiedandclone．Whencomparedwiththelargesubunitofphthalate dioxygenasegene(phtA)ofArthrobacterkeyseri，morethan96％ similaritieswereevidentinthenucleotidesequences．Theoptimalrgowth c