活细胞工作站技术在小鼠卵母细胞实时观察中的应用.pdfVIP

· 678 · 临床检验杂志2011年 12月第29卷第9期 ChinJClinLabSci，Dec．2011，Vo1．29，No．9 文章编号：1001-764X(2011)09-678-02 ·基础实验诊断研究 · 活细胞工作站技术在小 鼠卵母细胞实时观察中的应用 毕晔，张克梅 (南京医科大学组织胚胎学系，南京210029) 摘要：目的 将活细胞工作站 (LCS)应用于实时观察小鼠卵母细胞后期成熟和极体排放过程。方法 运用LCS技术平台，利 用hoechst33342标记DNA，同时结合明场观察 ，实时记录小鼠卵母细胞后期成熟和第二极体排放过程。结果 在建立最适工 作条件后，成功将 LCS技术平台应用于小鼠卵母细胞观察，获得 了第二极体排放的实时影像。结论 LCS技术可成功地应用 于小鼠卵母细胞观察，为进一步扩展 LCS应用范围，获得卵母细胞及早期胚胎生长发育过程的实时影像打下良好的基础。 关键词：活细胞工作站；卵母细胞；极体排放 中图分类号：R446 文献标志码：A Applicationoflivecellimagingsystem inreal-timeobservationofmouseooc~edevelopment Ye，ZHANGKe—mei(DepartmentofHistologyandEmbryology，NanjingMedicalUniversity，Nanjing210029，Jiangsu，China) Abstract：0bjective Toestablishaplatformoflivecellimagingsystem (LCS)appliedinreal—timeobservationoflatematurationand emissionprocessofthesecondpolarbody inmouseoocytesinvitro。M ethods ByusingLCSplatfomr ，thelatematuration andthe secondpolarbodyemissionprocessofmouseoocyteswereobservedandrecordedinrea1timebystainingwithDNA dyehoechst33342 andbrightfield．Result Byaseriesofscreening，thelivecellimagingplatfomr wasestablishedsuccessfullyandappliedinobserva— tionofoocytestoobtainclearreal—timemovieoftheprocessofthesecondpolarbodyemission．Conclusion LCStechniquemaybe appliedintheobservationofmouseoocytestoobtainreal—timeimagingofthedevelopmentalprocessofoocytesandearlyemb~o． Keywords：livecellstation；oocyte；polarbodyemission 活细胞工作站(1ivecellstation，LCS)利用电脑 TE2000EPFSLCS系统 (Nikon公司)。LCS专用培 可控的全电动显微镜以及配合载物台使用的细胞培 养皿购 自美国MatTek公司，平皿底面为玻璃材质。 养装置，目前主要应用于观察贴壁细胞或者低等动 1．2 动物 实验所用小 鼠为 ICR品系，在室温 (20 物或植物细胞的生长分裂迁移等过程 ¨引，而用于 ～ 22℃)、相对湿度50％～70％、12h／12h明暗交替 悬浮细胞 (特别是卵母细胞)或者早期胚胎的生长 光照的条件下饲养。动物使用经南京医科大学伦理 分裂等观察的还很少。本实验室结合本实验室的研 委员会同意。 究重点，通过一系列条件摸索，成功建立了利用LCS 1．3 卵母细胞的获得 对 8周龄的雌性小 鼠用孕 系统实时观察悬浮卵母细胞状态这一技术平台，并 马血清 (PMSG，10IU／只)及人绒毛膜促性腺激素 初步应用于MⅡ期卵母细胞后期启动和第二极体排