寄生养殖大菱鲆的海洋盾纤类纤毛虫（弗州拟尾丝虫相似种）的形态学和18S rDNA 序列分析.pdfVIP

研究报告 只日 7S 寄生养殖大菱鲆的海洋盾纤类纤毛虫(弗州拟尾丝虫相似种)的 形态学和 18SrDNA序列分析 许 拉，李天保，叶海斌，盖春蕾，朱安成，张 伟 (山东省海水养殖研究所 山东省海水养殖病害防治重点实验室，山东 青岛 266002) 摘要：从养殖大菱鲆(Seophthalmusmaximus)患病鱼体中分离出一种寄生纤毛虫，通过活体观察、碳酸 银法染色对其形态学特征进行分析，初步鉴定为弗州拟尾丝虫相似种 (Parauronemacf．virginianum Thompson，1967)。同时对其 18SrDNA序列进行 了测定和分子系统发育学分析，结果显示该纤毛虫序 列与弗州拟尾丝虫(Parauronemavirginianum)存在 8个碱基 的差异，序列相似性为 99％，表 明二者的高 度相似性。在对本纤毛虫的 18SrDNA序列和 GenBank中报道的 14种相关盾纤类纤毛虫相应序列相 似性和进化距离分析的基础上，作者构建 了包括迄今所有相关、已知种类的系统进化树。本研究为海 水鱼类相关病害的病原鉴定提供 了一份新的数据和资讯。 关键词：大菱鲆(Scophthalmusmaximus)；盾纤虫：弗州拟尾丝虫(Parauronemavirginianum)；碳酸银染 色：18SrDNA 中图分类号：$941Q959 文献标识码：A 文章编号：1000．3096(2011)12—0036—06 大菱鲆 (Scophthalmusmaximus)自1992年引人 中 离出病原纤毛虫，过滤海水为培养液，加新鲜大菱 国以来，取得 了良好的经济效益。然而近几年来，除 鲆鱼肉，室温培养 2～3d。 细菌和病毒性疾病外，寄生虫病 的危害也越来越突 1．2 纤毛虫的形态学与分类鉴定 出，其 中由嗜组织 的盾纤类纤毛虫所引起 的危害十 形态学研究方法包括：光学显微镜活体观察 、碳 分突出，产生了严重的经济损失[1]。 酸 银染 色法 [8-9]。本 文 采 用 的分 类 系 统 参 照 据文献报道，迄今 国内从养殖鲆鲽类病鱼体表 Corliss(1994)。 溃烂组织 中分离 出的该类纤毛虫中，已鉴定 出有贪 食迈 阿密 虫 (Miamiensisavidus)，蟹栖异 阿脑 虫 1．3 DNA的提取 (Mesanophrys earcini)，指 状 拟 舟 虫 (Paralembus 虫体经福尔马林 固定后，3000～3500r／min离心 digitiformis)以及水滴伪康纤虫(Pseudocohnilembus 富集，取富集虫体培养液50 L，加入450 L裂解缓 persalinus) 。 冲液 (10mmolTris—HC1，pH8．3；50mmolKC1；2．5 作者新近从大菱鲆病鱼组织 中分离 出一种纤毛 mmolMgC12；0．6％Tween 20；0．6％NonidetP40；60 mg／LProteinaseK)，56。C水浴 l～2h，常规酚氯仿法 虫，形态学分析，初步鉴定为弗州拟尾丝虫相似种； 抽提，用 50 L灭菌双蒸水溶解 DNA沉淀，一20~C保 并测定了该纤毛虫的 18SrDNA基因序列，分析 比较 存备用 】。 了与之相关 的 l4种盾纤毛虫相应序列的同源性，构 建 了系统发生树，从分子序列方面进一步确定 了该 1．4 PCR扩增 18SrDNA基 因序列