非梗阻性无精症睾丸基因表达谱研究.pdfVIP

维普资讯 中国男科学杂志2008年第22卷第5期 · 论 著 · 非梗阻性无精症睾丸基因表达谱研究水 孙 涛 朱一晨 金 哲 张 健 辛钟成 “ 北京大学第一临床 医院男科中心 (北京 100009) 摘要 目的 研究非梗阻性无精症 (NOA)睾丸基因表达谱变化，为研究其发病机制奠定基础。方法 知情同意下获取正常青年人和NOA患者的睾丸活检标本各3例，采用QIAGENRNA提取试剂盒提取总RNA，分 别等量混合后制备探针。利用ClonTech公司生产的包含8000个已知基因的人类 eDNA基因芯片[AtlasPlasticHuman8 KMi2croarray(Cat． 790521)】筛选差异表达基因。按基因功能分类方法对睾丸组织中差异表达的基因进行归类分 析。从基因芯片结果中选择我们感兴趣的基因用RT-PCR、T_A克隆测序方法验证。结果 筛选到显著差异表达基 因4117个 (上调基因1564个 ，下调基因2553个)。在表达上调的基因中代谢相关基因 (11．4％)，与基因和蛋 白表达相关的基因 (34．8％)，信号通路相关基因 (28．3％)，细胞分化相关基因 (16．5 ％)，细胞结构和运动 相关基因 (4．2％)，细胞或 内环境稳态相关基 因 (24．9％)。在表达下调的基因中代谢相关基因 (13．6％)，与 基因和蛋白表达相关的基因 (31．5％)，信号通路相关基因 (36．7％)，细胞分化相关基因 (13．5％)，细胞结构 和运动相关基因 (3．6％)，细胞或 内环境稳态相关基因 (20．1％)。RT—PCR及 T_A 克隆测序进一步证实TGF一13 信号通路中TGF31RII和Smad2基因在NOA患者睾丸组织显著上调。结论 NOA患者睾丸组织中基因表达谱发 生了明显变化，NOA与多种基因表达变化有关，其中TGF一31信号通路显著上调可能对进一步研究NOA的机制 具有重要意义。 关键词 少精子症； 寡核苷酸序列分析； 基因表达谱 中图分类号 R698．2 Studiesonthetestisgeneprofileofnon·obstructiveazoospermia SunTao，ZhuYichen，JinZhe，ZhangJian，XinZhongcheng AndrologyCenter,PekingUniversityFirstHospital,PekingUniversiyt,Beijing100009,China Abstract 0bjective Tounderstandthemechanismofnon—obstructiveazoospermia(NOA)，westudiedthetestisgene profileofthedisease．Methods Undertheapprovementbytheinstitutionalreview boardofPekingUniversity，threeNOA patientswithwererecruitedintothisstudy．Threeage—matchedvolunteerdonorswithhealthyrecordaccordingtotheir consentprovidedtheirnormaltesticularbiopsiesascontro1．TotalRNA wasextractedfrom thesetestisbiopsiesusing QIAGENRNAeasykit．TotalRNAfromthreeNOApatientswaspooledtogether．Likewise，thecontrolwasdone． DifferentiationsofgeneexpressionwerestudiedbyClon—TecheDNA microarraymethod．Thedifferentialexpress