以流式核型分析小麦根尖细胞的有丝分裂同步化过程.pdfVIP

作物学报 ACTA AGRONOMICA S~ICA 2011、37(10)：1794—1800 http：／／www．chinacrops．org／zwxb／ ISSN 0496—3490；CODEN TSHPA9 E—mail：xbzw@chinajourna1．net．ca DoI：10．3724／S J．1006．2011．01794 以流式核型分析小麦根尖细胞的有丝分裂同步化过程 郭东伟 1 张仁和 李春莲 陈耀锋 闵东红 陈 明2 李连成2 徐兆师2 马有志2 西北农林科技大学农学院，陕西杨凌 712100；中国农业科学院作物科学研究所，北京 100081 摘 要：构建染色体特异文库是简化小麦基因组测序的有效途径，而通过同步化处理提高根尖细胞有丝分裂指数， 使根尖细胞中富集高比例的中期染色体是实现染色体分选成功的前提。采用双阻断法用 50pmolL 羟基脲和 100 pmolL 氟乐灵对普通小麦根尖细胞进行同步化处理，然后用流式核型分析法观测各周期细胞在不同时间点上的比 例变化。结果显示，最佳方案为羟基脲处理 10h，恢复7h，氟乐灵处理4h。以此方案处理中国春小麦根尖可获得最 高的有丝分裂指数，达 70．1％。附加冰水处理(0℃)有助于减少染色体碎片和增加流式核型的分辨率，但对富集更多的 中期染色体没有效果。 关键词：小麦；有丝分裂；同步化；流式核型；分选 Analyzing Synchr0nizati0n ProcessofM itosisCellsin W heatRoot·tip with Flow Karyotype GUO Dong．W ei，ZHANG Ren—He1LIChun—Lian，CHEN Yao—Feng，MIN Dong—Hong，CHEN Ming， ， LILian．Cheng ，XU Zhao-Shi2 andM A You．Zhi ， AgronomyCollege，NorthwestAFUniversity，Yangling712100，China； InstituteofCropSciences，ChineseAcademyofAgriculturalSciences， Beijing100081，China Abstract：Genomicsequencingofwheatcanbesimplifiedthroughconstructingchromosomespecificlibrary．Synchronizationof cellsiSpropitioustohighmitosisindex(MI)，whichresultsintheaccumulationofmetaphasechromosomesnadasuccessfulflOW sorting．Inthepresentstudy,weusedadouble—blockedstrategyinhtesynchronizationtreatmentofwheat(Tr／ticumaestivumL．CV ChineseSpring)root—tipcellswitll50pmo1L-hydroxyurea(HU)and100pmolL_。trifluralin．Theeffectsoftreatmentswere evaluatedbyna alyzingthedynamicproportionsofcellsatdifferentstagesofcellcycle．Theoptimaltimeoftreatmentswere10h forHU block．7hforrecovery,nad4hofrtrifluralinblock．Accordingtohtissynchronizationscheme．tI1em~imum M 1was 70．1％．Additionalicewater(0℃)depressionwashelpfulofrdecreasingchromosomedebrisna drisingresolutionofhteflOW karyotype，buthadnoeffectontheaccumulationofmetaphasechr