人NRAGE基因启动子转录活性的初步研究.pdfVIP

第34卷第 3期 南京师大学报 (自然科学版) Vo1．34No．3 2011年 9月 JOURNALOFNANJINGNORMALUNIVERSITY(NaturalScienceEdition) Sept，2011 人 NRAGE基因启动子转录活性的初步研究 吴寅子 ，张 丽，温传俊 (南京师范大学生命科学学院分子细胞生物学研究所 ，江苏 南京 210046) [摘要] 利用生物信息学软件搜寻NRAGE启动子区域的转录因子结合位点，并根据这些位点利用 PCR技术克 隆NRAGE启动子不同区域的缺失突变体，分别插入 Luciferase报告载体pGL3一Basic载体中，构成8种缺失突变 体的报告基因表达载体．通过双荧光素酶体系检测在HEK-293细胞中NRAGE启动子不同区域的转录活性 ，从 而确定起主要作用的启动子区域．结果发现 NRAGE基因转录起始位点上游 一300bp到 一100bp的区域起到主 要的转录调控作用． [关键词] NRAGE，双荧光素酶法，缺失突变，转录活性 [中图分类号]Q78 [文献标志码]A [文章编号]lOOl-4616(2011)03-0090-05 TranscriptionActivityofHumanNRAGE GenePromoter WuYinzi，ZhangLi，WenChuanjun (InstituteofMolecularCellBiology，SchoolofLifeSciences，NanjingNodalUniversity，Nanjing21~46，China) Abstract：Weanalyzed humanNRAGE promoterregion bybioinformaticsoftworeandfoundputativebinding sitesof transcriptionfactors，then8differentfragmentswereamplifiedbyPCR andthemutantpromoterswereinsertedtoup— stream oftheluciferasegeneinluciferasereportvectorpGL3--Basicanddetectedthetranscriptionactivitybydual-·lucifer·· asereporterassaysysterm．Attranscriptionlevelwedetectedthattranscriptionenhancerelementsmayexistintheregion 一 300bpto 一100bp． Keywords：NRAGE，dual—luciferasereporterassay，deletionmutantion，transcriptionactivity NRAGE(Neurotrophinreceptor—interactingMAGEhomologue，MAGE：melanomaantigengene)基因是 由 Salhe在 2000年通过酵母双杂交的方法筛选到的与p75NTR相互作用的蛋白．隶属于恶性黑色素瘤抗原 家族成员，又称之为 MAGE—D1¨．定位于染色体Xpl1．21—11．23上，含有 l3个外显子和覆盖第二到第十 二个外显子的一个开放性阅读框 (ORF)．编码 778个氨基酸，构成分子量为 86kDa的蛋 白2J．NRAGE的 保守性强，在大鼠和小鼠体内都有该基因的类似物，NRAGE在发育早期以及成年个体中各个组织中都有 表达 ，这就意味着NRAGE可能发挥着重要的作用．在过去的研究中也确实发现NRAGE在生长发育、凋 亡 、分化以及肿瘤的转移过程中都有着调节作用 。 ．目前关于 NRAGE在疾病发生发展中的作用研究较 多，而对于基因启动子及转录活性调控方面的研究尚未见相关报道． 本研究利用生物信息学技术预测出NRAGE基因5端上游序列中的潜在启动子序列，并分析 NRAGE 启动子区域发现存在 GATA1，SRY，HIF1．ol，SP1，MZF1等多种转录因子结合位点．我们在试验中以 NRAGE转录