三氧化二砷对白血病NB4细胞PRAM蛋白的影响.pdfVIP

· l960 · 广东医学 2011年8月第 32卷第 15期 GuangdongMedicalJournalAug．2011．Vo1．32．No．15 三氧化二砷对 白血病 NB4细胞 PRAM蛋 白的 影响术 陈艾，沈兴，王珉，贾鹏 泸州医学院附属医院儿科(四川泸州 646000) 【摘要】 目的 探讨在 NB4细胞增殖过程中PRAM 蛋白表达的情况，并探讨三氧化二砷 (As，0)对PRAM 蛋白的影响。方法 (1)细胞增殖抑制实验：体外培养NB4细胞共 5d，用MTT法筛选As，0 有效干预浓度后，选 取As203(1ixmol／L)为 目的干预浓度。(2)Western blot：1Ixmol／LAs20 持续干扰 NB4细胞 l、2、3d后检测 PRAM蛋白的相对表达量。结果 (1)与空白对照组比较，5、1p~mol／及0．5~xmol／LAs，0 组细胞分男lj于培养过 程第 1、2、3天开始被抑制，0．1Ixmo]／LAs0 组细胞于第3天稍微被抑制后细胞生长良好。(2)1Ixmo]／LAs，0 干扰NB4细胞共3d，空白对照组及As，0组PRAM蛋白的表达在时间上有规律性：第2天表达最强烈，第3天表 达略降低。(3)1ixmol／LAs，0 使 PRAM蛋 白在各时间点的相对表达均较 空白对照组低 (P0．05)。(4)1 Ixmol／IAs0 使 NB4细胞PRAM蛋 白在第2天出现最大表达量，同时该组细胞出现生长抑制。结论 As0 是 能通过 PRAM位点来达到抑制急性早幼粒细胞 白血病增殖分化的 目的。 【关键词】 三氧化二砷 ；NB4细胞；Westernblot；PRAM蛋白 急性早幼粒细胞 白血病 (APL)在急性髓系白血病 观察细胞形态。 (AML)的FAB分型中属 M 型，占所有 AML病例的 1．3 W esternblot 10％ ～15％，约95％的APL患者携带 t(15；17)染色体 1．3．1 实验分两组 (1)空白对照组：不加药物，代之 易位 。60％～70％的t(15；17)APL患者 中伴有 PML— 等量 的 RPMI]64o；(2)As，0 组：加入终浓 度为 1 RARe~和 RARd2一PMI两种转录本 。三氧化二砷 ixmol／LAs0，，两组均持续作用 3d。 (As，0)对APL的抗肿瘤作用呈现剂量依赖的双向作 1．3．2 Westernblot分析 细胞裂解后 200Ixg蛋 白样 用 ，即小剂量诱导肿瘤细胞发生部分分化 ，较高剂量诱 品上样煮沸5rain，冷却后加样电泳并转膜。加入一抗 导细胞凋亡。不同浓度 As0 均能快速调变和降解 4cc过夜后加人二抗 37℃ 1h。最后化学发光显示 目 PML—RARo~。我们于2009年9月至2010年 1月用细 的条带 ，将 Westernblot结果用 QuantityOne图像分析 胞增殖抑制实验筛查出As，0 的有效干预浓度 ，选取 软件进行分析，内参校正，得 出积分光密度值 比值 ，代 1I~mo]／IAs0 为 目的干预浓度，在不同时间点观察 表相对含量。 其对 NB4细胞株 PML—RARe~的特异转录蛋 白PRAM 1．4 统计 学方法 用 SPSS10．0统计软件，采用 的影响，现报告如下。 TWO—WAYANOVA进行方差分析。 1 材料与方法 2 结果 1．1 主要试剂 人类 白血病细胞株 NB4细胞为本实 2．1 NB4细胞生长情况及As，0 对 NB4细胞增殖的 验室长期保存 。RPMI1640培养基 、标准胎 牛血清、 影 响 As，0、一抗 (羊抗人 IgG多克隆抗体 )来 自SANTA 2．1．1 NB4细胞正常生长情况 NB4细胞正常生长 CRUZ生物工程公司，二抗 (辣根酶系列)、PVDF膜等 情况下，随着时间推移，细胞数量逐渐增多，第 4、5天 来 自MILLIPORE。