产气荚膜梭菌β2-β1毒素融合基因在大肠杆菌中高效表达条件的优化.pdfVIP

江苏农业学报(JiangsuJ． Agr．Sci．)，2008，24(6)：800—804 产气荚膜梭菌 - 毒素融合基因在大肠杆菌中高效表达 条件的优化 曾 瑾， 王玉炯， 邓光存， 高蔚丰 (宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室，宁夏 银川 750021) 摘要： 本研究在已获得产气荚膜梭菌 13：一p毒素融合基因表达载体，并在BL21(DE，)中成功表达的基础上， 研究了以乳糖为诱导剂在不同条件下对 p一13，重组蛋 白诱导表达的影响，并对其表达条件进行了优化。结果表明， 重组菌株BL21(DE)(pXETB2B1)在 37℃、菌体诱导密度DD 为 1．0、乳糖诱导浓度为0．1g／L时诱导5h，目的 蛋 白的表达效果最好，乳糖则以分批添加的方式为佳。 关键词： 产气荚膜梭菌；融合蛋白；表达条件优化 中图分类号： Q344 ．13 文献标识码： A 文章编号： 1000-4440(2008)06—0800—05 OptimizingtheExpressionoftheBeta2-t·oxinandBeta1-·toxinFusionGene ofClostridiumperfrigensinE．coli ZENGJin， WANGYu—jiong， DENGGuang—clln， GAOWei—feng (KeyLaboratoryforProtectionandUtilization S‘pecialBiologicalResourcesinWesternChina，NingxiaUniversity，Yinchuan750021，China) Abstract： Basedontheexpressionofpltoxinandp2toxinfusiongeneofClostridiumperfrigensintherecombinant strainBL21(DE3)(pXETB2B1)，theexpressionconditionofthefusionproteinwasoptimizedwithlactoseasinducer．The highestexpressionwasobtainedwhentheconcentrationoflactosewas0．1 L，inductiontimewas5h，celldensityofin— ductionwasOD6x[】1．0andthetemperaturewas37℃ ，respectively．Thebestwaytoaddlactosewasthebatchprocessing． Keywords： Clostridiumperfrigens；fusionprotein；optimizationofexpressioncondition 产气荚膜梭菌 (Clostridiumperfringens)属腐生 无免疫相关性，分离峰不同。 性厌氧芽胞致病菌，是引起动物出血性肠炎、坏死性 影响外源基因在大肠杆菌中表达的因素很多， 肠炎、肠毒血症以及人类的食物中毒和创伤性坏疽、 除了对培养基组成、培养温度、比生长速率等优化培 气性坏疽的主要病原菌之一，主要引起动物猝死症 养条件的调控外，选择合适的诱导剂并对诱导条件 和肠毒血症 ¨J。其致病因子主要是菌体产生的外 进行优化也是重要的方面。非代谢性乳糖类似物 毒素，p和 p毒素即为其两种重要的毒力因子。两 IPTG即为一种高效的乳糖启动子诱导剂 。然而 种毒素具有相似 的生物学活性和 良好 的免疫原 由于 IPTG对于动物体具有潜在毒性且价格昴贵， 性 ’3J，但无明显基因序列和氨基酸序列的同源性， 在大规模 的发酵生产过程中会造成外源蛋 白生产成 本的增加。乳糖是一种二糖，没有毒性，价格低廉， 收稿 日期：2008-07Jo4 其本身作为一种碳源，可以被菌体代谢所利用，但作 基金项 目：国家 自然科学皋金项 目；宁夏大学 自然科学