用作植物疫苗的转基因胡萝卜的分子生物学筛选与鉴定.pdfVIP

2008年 12月 甘 肃 农 业 大 学 学 报 第 43卷 第 6期 68～71 JOURNALOFGANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY 双 月 刊 用作植物疫苗的转基因胡萝 卜的分子 生物学筛选与鉴定 苗 娜 ，李 霞 ，张金文 ，李 鹏。，杨 慧 (1．甘肃农业大学生命科学技术学院，甘肃 兰HI 730070；2．北京农林科学院蔬菜中心，北京 100097) 摘要：以包含有不同外源病毒基因的转基因胡萝 卜为试验材料，应用分子生物学手段，从DNA水平上和蛋 白质水 平上对这些材料加以鉴定，经PCR引物筛选后得到转基因胡萝 的阳性率为 38 左右；为保证实验的可靠性和可行 性．防止检测过程中遗漏和错误的发生，用特异的PCR引物对检测结果进行复选 ，得到的植株阳性率为 7％．在蛋白水 平上应用 EL1SA检测法检测获得的阳性植株 的结果与 PCR检测结果相同，且 同时发现外源基因在胡萝 根中的表达 量明显小于在叶中的表达量． 关键词 ：转基 因胡萝 卜疫苗 ；外源基因检测；蛋 白鉴定 中图分类号：Q785 文献标识码 ：A 文章编号：1003—4315(2008)05—0068—04 Screeningandidentificationoftransgeniccarrotforplantvaccines MIAO Na ，LIXia，ZHANGJin—wen ，LIPeng。，YANGHui (1．CollegeofLifeScienceandTechnology，OansuAgriculturalUniversity。Lanzhou730070，China； 2．VegetableResearchCenter，BeijingInstituteofAgricultureandForestry，Beijing100097，China) Abstract：Carrotwasusedasoneofthebioreactortoproducevaccine．Severalgroupsofprimerswere employedtodetectthetargetDNA fragments．TheresultsofPCR showedthatthepositiveratioreachedto 38 and7 respectively，bytheuniversalprimersandthespecialprimers．ELISA methodwasalsoem— ployedtodetecttheactivityofexpressionoftargetgene．TheresultswerematchedwiththatofPCR．A— mountoftargetgeneexpressioninrootshowedlessthanthatintheleaf． Keywords：transgeniecarrotvaccine；targetDNA identification；proteinassay 随着植物基因工程的发展 ，植物除了生产 自身 物反应器显示 出了诱人的前景． 蛋 白质外，它还能够表达来 自动物、人类、病毒和细 基因转化操作完成后，外源基因是否进入受体 菌等的蛋 白质．目前转基 因植物不仅在基因表达调 植物细胞，进入细胞后能否整合到植物染色体上，整 控、作物遗传改 良和生物反应器等方面有重要的应 合后的外源基因能否表达、表达量有多少以及是否 用[1]，而且在外源基因表达、产物修饰和生物活性等 可产生理想的 目的表型等问题 ，都需要进行一系列 方面也已取得 了重要进展 [2．由于植物生产系统易 检测分析来验证．因此检测鉴定方法的确立对于筛 于大规模生产外源蛋 白，转基因植物作为廉价的生 选能够稳定遗传并表达外源基因的转基因植株至关 重要． 作者简