高丛越枯内生真菌的分离及其优势种群的鉴定.pdfVIP

2010年第 5期 现代园艺 高丛越枯内生真菌的分离及其优势种群的鉴定 阮珍美 陈火根 (江西省樟树市五脑峰林场，樟树 331200) 越桔又叫蓝莓，属杜鹃花科植物，为常绿或落 镜、蔗糖 、分析纯 (AR)、琼脂、(卡拉胶条状 )、 叶灌木，喜生于微酸性土壤，有些为酸性土壤指示 95％乙醇、分析纯 (AR)、次氯酸钠、分析纯 植物。广泛分布于北半球，从北极到热带高山地区 (AR)。 均有分布，全世界约有400多种。越桔果实富含 1．3 培养基 糖、有机酸、维生素C和B。我国本属植物种质资 分离培养基：水琼脂培养基 (WA)，纯化培养 源较为丰富，约有90多种 l【】，是很有开发利用前景 基 ：马铃薯蔗糖琼脂培养基 (PDA)。 的一类野生果实，如能得到合理利用 ，将产生较大 2 试验方法 经济效益2[】。 2．1 培养基的制备 越桔果实是以花青甙为主的深蓝色，味酸甜， 2．1．1分离培养基的制备。琼脂20g、水 1000ml、 稍有黏性的果胶质，并有香味。果实的药用功能对 pH值 自然，在水 1000ml中加入20g琼脂，煮至琼 眼睛的作用较显著3【】。越桔含有的花色素具有较强 脂全部溶化。 的抗氧化剂作用，长期食用可协助清除视网膜内 2．1．2纯化培养基的制备。马铃薯20％、蔗糖20g、 有毒化学质、自由基等，增加视网膜紫红素生成 ， 琼脂 20g、水 1000ml、pH值 自然，马铃薯洗净 ，去 提高夜视能力，帮助眼睛适应强弱光的变化。还可 皮 ，切成小块 ，放入水 中煮至用玻璃棒一触即碎 ， 以强化毛细血管，改善血液循环，减弱血小板的粘 用 6层纱布过滤，加入蔗糖和琼脂 ，加水配制成 滞性 ，防止血凝块的产生，增强心脑功能 lJ【。越桔中 1000ml溶液，加热搅拌均匀即可。 的叶酸能预防子宫癌 ，并对孕期胎儿的发育大有 2．1．3培养 基 的灭菌方 法 。固体培 养基在 益处 ，同时对体外肝癌细胞的培养具有显著的抑 1．05k~em2，121oC高压蒸汽灭菌20min。分装于培 制率。越桔还有抗衰老和缓解眼部疲劳等独特的 养皿备用。 医疗保健作用。 2．2 内生真茵的分离 内生真菌是指一类生活在植物组织 内，但不 2．2．1样品消毒处理。先取越桔健康叶片用 自来水 引起植物明显病害的真菌，是植物微生态系统的 冲洗干净 ，晾干水分后 ，采用 96％乙醇处理 30 重要组成部分用。内生真菌长期生活在植物体内的 秒、2．5％次氯酸钠处理 60～180、96％乙醇处理30 特殊环境中，并与宿主协同进化，在演化过程中二 秒进行表面消毒。 者形成了互惠共生关系。该菌可产生与宿主相同 2．2．2组织块印迹法。植物样本经过表面消毒后， 的抗癌什汹护物紫杉醇，通过微生物发酵生产紫 选取整片叶片放在WA培养基上，25cI=恒温培养 杉醇，可减少人类对紫杉资源的破坏，同时为今后 l周，观察记录是否有真菌生长，有菌丝长出即可 大量生产紫杉醇满足患者的需求、造福人类开辟 进行内生真菌的分离与纯化。 了一条新途径。 2．2．3内生真菌的分离与纯化。采用组织块分离 1 试验材料 法。在无菌状态下，取处理后的越桔叶片切成 1．1样本来源 0．2em×0