西藏牦牛胎儿成纤维细胞的分离与培养.pdfVIP

一 42一 江苏农业科学 2011年第39卷第3期 任子利，赵彦玲，王建洲，等．西藏牦牛胎儿成纤维细胞的分离与培养 [J]．江苏农业科学，2011，39(3)：42—45 西藏牦牛胎儿成纤维细胞的分离与培养 任子利，赵彦玲 ，王建洲，李瑜鑫，强巴央宗 (西藏农牧学院动物科学学院，西藏林芝860000) 摘要：对西藏牦牛胎儿成纤维细胞的分离和培养进行了研究。利用组织块法和酶消化法均能成功分离培养西藏 牦牛胎儿成纤维细胞，通过细胞的传代培养、形态学和动力学观察与分析，结果表明，所建立的西藏牦牛胎儿成纤维细 胞系具有典型的成纤维细胞形态 ；西藏牦牛胎儿成纤维细胞要经历滞留期、对数期、平台期，分别为0～2d、2～7d、 7—8do试验结果表明，已成功培养了西藏牦牛胎儿成纤维细胞。 关键词：西藏牦牛；胎儿 ；成纤维细胞；体外培养；分离 中图分类号 ：$823．991 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2011)03—0042—03 西藏在我国五大牧区中是一个十分独特的地域，其罕见 1 材料与方法 的海拔高度、复杂的气候环境 、广阔的高原草场，故而有极其 丰富的牛种资源，仅家养牛种就有牦牛、黄牛等。根据 2009 1．1 试验动物与试剂 年的统计资料，我国现有牦牛 1400万头 ，其中西藏牦牛645 1．1．1 试验动物 2月龄左右西藏牦牛胎儿购 自林芝地区 万头 J。西藏牦牛独特的生理结构和较强的高原适应性具 屠宰场。 有很高的科研价值 ，但由于受地理环境和试验设备条件等的 1．1．2 主要试剂 高糖DMEM培养基，DPBS粉剂 (Gibco)， 限制，对西藏牦牛细胞特性的研究极为有限，而在寒冷、干旱、 胎牛血清 (FCS)(杭州四季青生物工程材料有限公司)，丙酮 低温、低压、强辐射、高海拔等生境条件下开展西藏牦牛体细 酸钠、trypsin(胰蛋白酶)、DMSO(二甲基亚砜)均为 Sigma公 胞的研究，可为转基因牦牛和克隆转基 因牦牛等研究提供必 司产品，台盼蓝溶液(碧云天生物研究所)。 要而又关键的技术依托，同时也为我国青藏高原特有的其他 1．2 试验方法 家畜品种和濒危野生动物的种质资源保护提供借鉴。 1．2．1 材料的获取与准备 从屠宰场将西藏牦牛胎儿连同 自体细胞克隆羊 出生 以来 ，克 隆技术引起 了广泛关 子宫一起及时带回实验室。用含双抗的生理盐水彻底清洗子 注 。体细胞克隆技术以其在动物繁殖、品种改良及育种中 宫 ，用手术剪在DPBS液中剥除胎膜，将分离出的牦牛胎儿用 的巨大潜力及广阔的应用前景而备受广大动物科技工作者关 DPBS液洗2遍后用 自配 70％的医用酒精消毒，最后再用 注。同时，动物体细胞作为保存动物遗传资源的一种补充，日 DPBS洗 1遍。转移到超净工作台内，去除胎儿四肢、内脏 、 渐受到人们的重视 。鉴于体细胞克隆技术在动物繁殖和 头，放人70％医用酒精中浸泡 1min，用DPBS溶液冲洗3遍 ， 人类疾病治疗领域的广阔应用前景，与体细胞克隆技术相关 放人无菌平皿中待用。 的体细胞培养也 日益受到重视。然而在高原生境下开展西藏 1．2．2 成纤维细胞的分离和培养 牦牛等高原物种的体细胞分离和培养方面的研究尚未见相关 (1)组织块法。取上述处理的部分组织，在灭菌青霉素 报道。本研究以西藏牦牛胎儿为材料，探讨体外培养方法获 瓶中放人胎儿组织碎块，用眼科剪反复剪切，将其剪碎成 1 得西藏牦牛胎儿成纤维细胞的可行性，通过西藏牦牛胎儿成 mm 大小的组织块，加入2mLDPBS(1500r／min，5min)，置 纤维细胞的分离及原代、传代培养和冷冻方法 ，观察其在体外 于离心管中，离心洗涤3遍，再用含 10％FCS的DMEM培养 的生长特性，建立西藏牦牛胎儿成纤维细胞系，为在高原生境 液洗 1遍 ，将组织块转入无菌