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食品研究与再：8} 2011年6月 基础研究 FOodResearchAndDevelopment 第 32卷第6期 对不同温度酶解液制备酪蛋白磷酸肽的探讨 唐婷，覃海元 (广西农业职业技术学院，广西 南宁530007) 摘 要：采用胰蛋白酶水解酪蛋白，可释放出促进钙吸收的酪蛋白磷酸肽。主要研究在40、50、60℃3个不同温度下。 用胰蛋白酶水解酪蛋白，沉淀经干燥后，用SephadexG一25柱层析进行分离纯化的效果。从洗脱图谱可以看出，3个温 度下的CPPs洗脱体积与标准品相比基本一致，都在8mL40mL处出峰，产品主要集中在峰 1，说明蛋白质的肽键已 基本被打断，得到了所需要的短肽。而60℃下所得CPPs产品的NP／1摩尔比)最小，纯化效果较好是较理想的制备条件。 关键词 ：酪蛋白磷酸肽；葡聚糖凝胶；分离纯化；N／P(摩尔比) DiscussionofPreparationofCaseinPhosphopetidesofEnzymeSolutionatVariousTemperatures TANGTing，QINHai-yuan (GuangxiAgriculturalVocationalandTechnicalCollege，Nanning530007，Guangxi，China) Abstract：Thecaseinwashydrolyzedbytrypsinatthreedifferenttemperaturesof40，50，60℃，theprecipitation wasseparatedbyusingSephadexG-25．Incomparisonwithstandard，theelutionvolumewas8mL--40mL， roughlythesame，whichshowedthatpeptidebondswerebrokenbasically．TheN／P(molraratio)ofCPPsat60℃ waslowerthanohtertwotemperaturesandwasanidealprepraationcondition． Keywords：CaseinPhosphopetides(CPPs)；sephadex；purification；NP／(molarratio) 酪蛋白磷酸肽 (CaseinPhosphopeptidesCPPs)是 干燥后，以NP／摩尔 比为检测标准 ，得出制备的适宜温 以牛乳酪蛋白为原料，经过单一或复合蛋白酶的水 度，为酪蛋白磷酸肽的生产提供科学参考。 解，再对水解产物分离纯化后得到的含有磷酸丝氨酸 簇的天然生理活性肽。CPPs的核心部位是由3个磷酸 1 材料与方法 丝氨酸残基组成的一个一Ser(P)一残基簇，后面紧接着 1．1 材料 2个 Glu一残基 【1。由于牛乳酪蛋白存在 4种不同的蛋 酪蛋白：生化纯，成都科龙化工试剂厂；胰蛋白酶 白质结构闭，因此不 同结构的酪蛋 白水解得到的CPPs (farcochemicalsupplie)(1：250，活力：45000U／g)：成都 的结构也有所差别 ，有 0l和 p2种嘲。 奥克生物有限公司；葡聚糖凝胶 ：SephadexG一25；酪蛋 研究表明，在动物小肠内pH呈中性到弱碱性的 白磷酸肽标准品(日本生产 ，纯度98％，保质期 28do 环境中，CPPs能阻止磷酸钙沉淀的产生，使肠内溶解 1．2 主要仪器与设备 钙保持在较高水平 ，从而促进钙的吸收和利用。同时， AKTAprimeplus蛋 白质纯化系统 ：Amersham 还能与铁 、锌等矿物质形成可溶性络合物，提高生物 biosciences；Milli—QBiocel超纯水仪 ：Millipore公司； 利用率嘲，是一种新型的食品添加剂和保健功能因子。