水产动物及其产品中乙烯雌酚、甲孕酮液相芯片检验技术规范.docVIP

ICS 点击此处添加中国标准文献分类号 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 XX/T XXXXX—XXXX 水生动物及其产品中乙烯雌酚、甲孕酮液相芯片检验技术规范 Liquichip Quarantine protocol for simultaneous detection of DES and MPA in Aquatic Animals and Products 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 发布 前言 本标准根据GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则》的要求编写。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局，上海大学。 本标准主要起草人：王艳；陈沁；李小林；林颖峥；李健；陈政晓。 水生动物及其产品中乙烯雌酚、甲孕酮液相芯片检验技术规范 范围 本标准规定了水生动物及其产品中乙烯雌酚、甲孕酮的液相芯片检测方法，包括样品处理、检测方法、结果判定。 本标准适用于水生动物及其产品中乙烯雌酚、甲孕酮的快速筛选。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 缩略语 MPA 甲孕酮 （Medroxyprogesterone Acetate） DES 乙烯雌酚 （Diethylstilbestrol） SAPE 藻红蛋白标记的链霉亲和素 （Streptavidin R-phycoerythrin conjugate） MFI 平均荧光强度（Median fluorenscence intensity） 仪器设备 液相芯片系统（Luminex 100/200或等效设备。） 微孔滤板抽滤器 真空气泵 37℃摇床 电子天平：精度0.01g 微量移液器 旋涡振荡仪 试验原理 本方法基于免疫学抗原抗体特异性反应原理。标准品或样品中的抗原能与荧光微球上偶联的抗原竞争性地结合定量的生物素化抗体（Bio-tin），加入SAPE后，通过液相芯片系统检测样品的MFI，MFI与样品中的抗原浓度成反比，从而达到定量测定样品中MPA和DES的目的。 主要试剂和耗材 试剂 本标准所用水应符合GB/T 6682中二级水的规格。下列试剂除特殊规定外，均指分析纯试剂。 乙酸乙酯 乙腈 正己烷 磷酸二氢钠 磷酸氢二钠 氯化钠 氯化钙 牛血清白蛋白（BSA） 叠氮化钠 吐温-20 生物素标记试剂盒：Biotin Labeling Kit-SH（Pierce）或等效试剂盒（由指定单位提供，给出这一信息是为了方便本文件的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。） 微球交联试剂盒：Amine Coupling Kit （Bio-Rad） 或等效试剂盒（由指定单位提供，给出这一信息是为了方便本文件的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。） 液相芯片仪校准试剂盒：Bio-Plex Calibration Kit（Bio-Rad）或等效试剂盒（由指定单位提供，给出这一信息是为了方便本文件的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。） 液相芯片仪校验试剂盒：Bio-Plex Validation Kit（Bio-Rad）或等效试剂盒（由指定单位提供，给出这一信息是为了方便本文件的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。） DES/MPA标准品稀释液（见附录A.2） 偶联有MPA抗原的微球（制备见附录B） 偶联有DES抗原的微球（制备见附录B） 生物素化的甲孕酮单抗（制备见附录C） 生物素化的乙烯雌酚单抗（制备见附录C） 1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐（EDC） N-羟基硫代琥珀酰亚胺（Sulfo-NHS） 藻红蛋白标记的链霉亲和素SAPE（1mg/mL） 灭菌双蒸水 耗材 羧基化编码微球 96孔滤板 离心管：50 mL 消毒液：10%的次氯酸钠溶液（含有效氯10%） 液相芯片仪样品流路鞘液 样品的液相芯片检测 试样制备 鱼 用清水将鱼表面彻底清洗，擦干表面水分，取两侧肌肉，将鱼肉均质。 虾 用清水将虾表面洗净，擦干表面水分，去虾头，剥外壳，取虾肉，将虾肉均质。 贝类 用清水将贝壳外表彻底洗净，切断闭壳肌，开壳（开壳前不应加热或用麻醉