犬恶丝虫病检疫技术规范.docVIP

ICS点击此处添加ICS号 点击此处添加中国标准文献分类号 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 XX/T XXXXX—XXXX 犬恶丝虫病检疫技术规范 Quarantine Technology Protocol for Canine Dirofilariasis 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 （本稿完成日期：2012年3月11日星期日） XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 发布 目次 前言 II 1　范围 1 2　规范性引用文件 1 3　术语和定义 1 4　生活特性 1 5　形态特征 2 6　检疫方法 2 7　综合判定 3 附录A（资料性附录）　 4 附录B（资料性附录）　 5 附录C（资料性附录）　犬恶丝虫 6 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准按照SN/T 2384—2009 动物检疫标准英文用语翻译规范起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国四川出入境检验检疫局、四川农业大学。 本标准主要起草人：余华、杨光友、严玉宝、陈世界、胡娟、崔鹏博、周岷江。 动物犬恶丝虫检疫技术规范 范围 本标准规定了犬恶丝虫的检疫方法。 本标准适用于犬恶丝虫微丝蚴及的和检疫。术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 犬恶丝虫（Dirofilaria immitis） 又称犬心丝虫（eart worm），为双瓣科、恶丝属（Dirofilaria）的虫种。犬恶丝虫的成虫寄生于犬心脏的右心室及肺动脉（少数见于胸腔、支气管、皮下结缔组织等处）引起循环障碍、呼吸困难、贫血、猝死等症状丝虫病一种丝虫病。除犬外，猫和野生动物以及人均可感染与发病。该病不仅危害犬猫等动物的健康，而且对人类健康亦构成威胁。 微丝蚴Microfilariae） 为犬恶丝虫的雌虫和雄虫交配后，雌虫胎生产出的幼虫。微丝蚴生活于动物的外周血液中。生活特性 犬恶丝虫寄生于犬、猫的右心室和肺动脉。中间宿主为蚊子（中华按蚊、白纹伊蚊、浅色库蚊等）。雌虫产出的微丝蚴进入外周血液内，在外周血液中可生存一年或一年以上，但被中间宿主吞噬以前不能进一步发育。夏季蚊子吸食动物血液，微丝蚴随血液进入蚊体内，在其体内约2周发育为第三期感染性幼虫。蚊刺吸犬、猫血液时，第三期幼虫从蚊子口器中逸出，迅速钻进动物宿主皮肤，在皮下结缔组织、肌间组织、脂肪组织和肌膜下发育，经第三次、第四次蜕皮成为童虫，然后进入静脉，移行到右心室及大血管内，继续发育为成虫。从蚊子叮咬感染到发育为成虫需6～7个月。成虫除寄生在右心室及肺动脉外，也可在后腔静脉、前腔静脉到肺动脉的毗连血管内寄生。在终宿主体内成虫可生存5～6年，并不断产生微丝蚴。 形态特征 微丝蚴 无鞘膜，大小为218～329μm×5～7μm，尾部细长，体内除含有体核外还具有神经环、排泄孔、排泄细胞、生殖细胞、肛孔及尾核。 成虫 虫体呈微白色，细长粉丝状。口由6个不明显的乳突围绕。雄虫长为12～20cm，后部呈螺旋状卷曲，有窄的尾翼膜，末端有尾乳突11对（肛前5对、肛后6对），交合刺2根，长短不等。雌虫长为25～30cm，尾端钝圆，阴门开口于食道后端。 检疫方法 设备和器械光学显微镜、普通离心机、恒温培养箱、硝酸纤维膜（NC膜）μL、200μL、1000μL各一支）、梯度PCR仪、-20 ℃低温冰箱、-70 ℃超低温冰箱、水平电泳槽、pH计、电子天平、冷冻离心机、紫外可见分光光度计、超净工作台、超纯水系统、凝胶成像分析系统、恒温培养箱、恒温水浴锅、干燥箱、全自动高压灭菌锅、制冰机、电泳仪、振荡培养箱、磁力搅拌器，实验室其常规器材。美蓝染色液包被缓冲液CBS； BAS封闭液； PBS缓冲液； PBST洗涤液底物溶液酶联葡萄球菌A蛋白（HRP-SPA）犬恶丝虫犬恶丝虫犬恶丝虫0.2 mg/mL； 总DNA抽提试剂盒胶回收试剂盒PCR扩增引物Master Mix； DNA Marker（DL2000）琼脂糖（agarose）Tris-base； DEPC（焦碳酸二乙酯）胰蛋白胨（Tryptone）酵母提取物（Yeast Extract）氨苄青霉素（Ampicillin）NaCl； NaOH； 冰醋酸Pmd19-T； solutionⅠ； 感受态细胞DHαLB 液体培养基（pH 7.2）LB 固体培养基（pH 7.2）0.5 mol/L EDTA（pH8.0）TBS（Tris 盐缓冲液）10 ％SDS 溶液（100ml）见附录B犬恶丝虫抗体检测（Dot-ELISA法）血清制备待动物采集血液5 mL，3 000 r/min 离心5 min，取上清（血清），备用。 诊断膜制备用铅笔在硝酸纤维素膜（NC膜）光滑面将膜划成5 mm × 5