5-AzadC联合TSA对人胃癌SGC-7901细胞生长及Reprimo基因表达的影响.pdfVIP

安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2012Jan；47(1) ·1· ◇基础医学研究◇ 5-AzadC联合TSA对人胃癌 SGC．7901细胞生长及 Reprimo基因表达的影响 王 海 ，胡世莲 ，沈 干。，孙玉蓓 ，沈国栋 ，徐维平 ，黄毕林 ，方中良 摘要 目的 探讨5一氮杂2一脱氧胞苷 (5-AzadC)联合 曲古 的机制，为治疗 胃癌提供分子生物学证据。 抑菌素A(TSA)对人 胃癌 SGC一7901细胞生长及 Reprimo基 因表达的影响。方法 SGC-7901细胞分为对 照组、5-Aza— 1 材料与方法 dC、TSA、5-AzadC+TSA组，MTS法测定各组药物对其生长 1．1 药 品与试 剂 人 胃癌 细胞 系 SGC-7901 的影响 ，RT．PCR和WesternBlot法分析 SGC一7901细胞 Rep— (ATCC，美 国)；RPMI1640培养基 (Gibco公司，美 rimo基因mRNA和蛋 白表达情况。结果 5-AzadC和 (或) TSA分别作用24、48、60、72h后均抑制细胞生长 ，两药联合 国)；MTS试剂 (Promega公司，美国)；5-AzadC、TSA 组 比单药组抑制率显著增强，并且随着药物浓度增加和作用 (Sigma公司，美 国)；RT—PCR反转录试剂盒 (Pro- 时间延长 ，抑制率增强更加显著；5-AzadC和 (或 )TSA干预 mega公司，美 国)；TRIzol(Invitrogen公司，美 国)； 胃癌细胞 72h后，联合用药组和单药组比较，ReprimomRNA Taq酶 (TaKaRa公司，日本)；引物 (上海生工生物有 和蛋 白的表达显著增强 (P0．05)。结论 5-AzadC联合 限公司，中国)；BCA蛋 白浓度测定试剂盒 (碧云天 TSA干预可抑制 SGC-7901细胞生长 ，抑癌基 因Reprimo再 生物技术研究所 ，中国)；Reprimo兔抗人多克隆抗 表达发挥抑癌作用。 体(博奥森生物技术有限公司，中国)；3-actin一抗、 关键词 曲古抑菌素A；5一AzadC；SGC-7901细胞 ；Reprimo基 二抗 (北京中杉金桥公司，中国) 因 1．2 实验仪器 CO，培养箱(Thermo公司，美 国)； 中图分类号 R735．2 超净工作台(苏州净化集团，中国)；酶标仪 (Tecan 文献标识码 A 文章编号 1000—1492(2012)O1—0001—05 公司，奥地利 )；PCR仪 (Biometra公司，德 国)；电 胃癌是多因素联合导致的疾病 ，随着对发病机 泳、电转移系统、凝胶成像系统 (Bio—Rad公司，美 制的深入研究，目前普遍认为除表观遗传学改变是 国) 继遗传学改变之外，与肿瘤发生发展及治疗具有密 1．3 实验方法 切 的关系。表观遗传学主要包括 DNA甲基化、组蛋 1．3．1 细胞培养及药物处理 人 胃癌 SGC一7901细 白修饰 、基因组印记、染色体重塑等，其 中研究深入 胞系培养于含 10％新生牛血清的RPMI1640培养 的为DNA甲基化和组蛋 白修饰 ¨。该研究 旨在 了 液中，37~C、5％CO，，95％湿度的恒温密闭式培养箱 解去甲基化制剂5一氮杂一2脱氧胞苷(5-AzadC)与组 中培养，取对数生长期的细胞，用含 1％新生牛血清 蛋 白去 乙酰化酶 (Histonedeacetylase，H