HIV耐药性毒株检测的意义与方法-中国疾控中心.pptVIP

耐药性突变计分及耐药性解释 高度耐药(H) 中度耐药(M) 低度耐药(L) 潜在低度耐药(PL) 敏感(S) 0－9分 10－14分 15－29分 30－59分 大于60分 HIV-1基因型检测方法：TRUGENE HIV Genome Coverage Pr1 Pr46 RT1 RT41 RT140 RT215 RT333 ~1.3kb RT-PCR Product Protease P2 RT Beginning RT Middle Codon Protease: 1-99 Codon RT: 41-247 RT (39-247) Protease (4-99) HIV-1基因型检测方法：ViroSeq? HIV-1 Genotyping System 1.8 kb RT-PCR product B C G H A F D protease reverse transcriptase Forward primer Reverse primer Protease (1-99) RT (1-335) 1 99 1 335 优点：简便快速、经济 缺点：间接定性测定耐药性 解释结果往往困难 没有临床临界值（Cut-off） 不能立刻检测对新药的耐药性 条件：病毒载量500-1000cp/ml突变株占病毒准种的20％以上 基因型耐药性检测的特点 0 基因型耐药检测报告应包括特定突变临床意义的解释 基因型耐药检测结果的解释 但 是 很多突变准确的临床意义仍不清楚 突变之间的相互作用使得临床意义的估计更加复杂 基因型耐药检测结果还没有标准的解释 不能检测劣势毒株 (10%-20% ) 优点：直接定量测定耐药性 结果容易解释 有临床临界值（Cut-off） 可立即检测对新药的耐药性 缺点：操作复杂、价格昂贵、耗时长 表型耐药性检测 传统的表型耐药性检测方法 分离培养HIV HIV感染性滴度测定 定量HIV感染PBMC细胞，培养 培养液含系列稀释的待测药物 HIV药物敏感毒株 测定培养上清液的P24抗原 与野毒株比较并计算IC50， 表型耐药性检测方法 结果表达方式:病毒的50%抑制浓度(IC50)与野毒株相比增 加的倍数 药物浓度 病毒抑制率 (%) 野生型病毒 耐药株 100 0 IC50, WT IC50, MT 50 耐药倍数 IC50 = 50% 抑制浓度 结果解释 检测值的界定 - 如2-10倍=中度耐药；10倍=高度耐药） 生物学 - 超过未治疗患者体内分离病毒药物抑制浓度的范围 临床 - 倍数与临床研究中的病毒复制抑制失败相关 表型耐药性 通常用病毒与实验室标准株比较的IC50值增加倍数表示 耐药性检测对象 Guidelines for the Use of Antiretroviral Agents in HIV-1 Infected Adults and Adolescent (2008.1.29) 所有进入医学观察的病人，不论是否治疗 治疗之前 未治疗的病人，首选基因型方法 改变治疗方案时 病毒抑制不理想时 病毒学失败的病人 孕妇 仍在服药，或停药4周内检测 不推荐对HIV RNA 1000cp/ml的病人进行检测 操作过程中的污染控制 合格的样品 数据处理和存档 结果解释 质量保证和能力验证 基因亚型 病毒载量数据 进行耐药检测时实验室应考虑的影响因素 样品的收集与运输 样品跟踪Sample ID tracking 样品交叉污染 序列测定是扩增子污染 信息技术 (IT) 影响因素 影响基因型和表型耐药检测应用的因素 耐药性和临床治疗失败之间存在着复杂的关系，难以准确评估耐药性在病毒学失败中所起的作用 体内的HIV-1病毒有无数的变种，非优势毒株通常难以检测出 在每一类药物中都存在着交叉耐药现象，即使通过检测发现了，也常常因为交叉耐药而限制了药物选择的范围 但即便如此，由于耐药性检测可以提供某些前瞻性的数据，从而可以避免选择可能发生耐药性的药物，对提高抗病毒治疗的效果仍具有积极的意义 学习小结 耐药性产生是在药物选择压力下，耐药变异株完全取代药物敏感株 耐药株检测结果的分析有利于对临床HIV/AIDS治疗失败的原因做出正确解释并指导制订新的治疗方案 可以利用基因型检测方法和表型检测方法对HIV耐药性进行检测 进行耐药检测时实验室应考虑多种影响因素 感谢聆听 欢迎交流！ 您已完成本课学习，可点击考试按钮参加考试！ This afternoon I will briefly describe the tests for drug-resis