牛脂联素基因真核表达载体的构建及鉴定.pdfVIP

HeilongjiangAnimalScience 4 andVeterinaryMedicine No12 2009 牛脂联素基因真核表达载体的构建及鉴定 黄海龙 ，王 哲 ，于国健 ，孙 佳 (1．吉林大学 畜牧兽医学院，吉林 长春 130062；2．吉林农业大学 动物科学技术学院，吉林 长春 130118) 中图分类号：$823 文献标识码：A 文章编号：1004—7034(2009)12—0004—03 关键词：牛；脂联素基因；真核表达载体 摘 要：为了构建牛脂联素基因真核表达载体，试验采用RT—PCR方法扩增牛脂联素(bovineadi— ponectin，BovADPN)基因，将其克隆到pMD18一T载体 中，测序正确的质粒经 EcoR I和NotI双酶 切，回收 目的基因片段将其定向克隆到pPICZotA载体中，构建重组质粒pPICZo~ABovADPN。结果表 明：克隆的基因序列与GenBank公布的序列有 100％的同源性；目的基因正向插入，阅读框正确无误， 说明牛脂联素基因真核表达载体构建成功。 Constructionandidentificationofeukaryoticexpressionvectorofbovineadiponectingene HUANGHai—long ，WANGZhe，YUGuo—jian，etal (1．CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，JilinUniversity，Changchun130062，China；2．CollegeofAnimalScienceandTechnology， JilinAgriculturalUniversity，Changchun130118，China) Keywords：Bovine；adiponectingene；eukaryotieexpressionvector Abstract：Toconstructeukaryoticexpressionvectorofbovineadiponectingene，thefulllengthcDNAencodingADPNofbovinewasamplifiedby RT—PCRwiththespecificprimers．ThenthegeneofADPNwasclonedintothevectorT．Itwassubclonedintotheeukaryoticexpressionvector pPICZctA afterthesequencewasidentifiedbydoublerestrictionendonucleasesdigestionandsequencinganalysis．Theresultsshowedthatthe genefragmentshowed100％ identitytoADPNcDNA whichhadbeendepositedintheGenBankdatabase，ligationdirectionoftheobjective genefragmentwascorrectandwasinargeementwithcorrectreadingframe．ItshowedthateukaryoticexpressionvectorpPICZcLA—BovADPN hadbeenconsturctedsuccessfully． 研究发现，脂肪组织除储存三酰甘油外，还具有 入酵母基因组、诱导分泌表达重组牛脂联素奠定了基 活跃的内分泌功能…，其分泌的多种激素与细胞因 础。 子参与神经、内分泌与免疫网络的调节，尤其是对能 1 材料和方法 量代谢的调节具有重要的作用。其中的脂肪细胞特 1．1 菌株和质粒、酶及主要试剂 异性因子——抵抗素 (resistin)和脂联素 (adiponec．