甜菜夜蛾多酚氧化酶的特性及其对曲酸等抑制剂的反应.pdfVIP

中国农业科学 2004,37(5):687-691 ScientiaAgriculturaSinica 甜菜夜蛾多酚氧化酶的特性及其对曲酸等抑制剂的反应 高兴祥，罗万春，谢桂英，薛超彬，丁 琦 (山东农业大学农药毒理与应用技术省级重点实验室，泰安 271018) 摘要:以甜菜夜蛾5龄幼虫为试材提取多酚氧化酶，经40%饱和度硫酸馁沉淀、SephadexC-100凝胶过滤等步 骤部分纯化后，总活力回收率为26.67%,酶活力提高8.56倍。以邻苯二酚为底物，测得该酶反应的最佳条件: pH=6.5,T-400C，米氏常数戈=10.73mmo1-L-。研究了曲酸、香草酸等5种化合物对该酶活力的影响，结果表明， 除芦丁外均对其酶活力产生一定的抑制作用，其中以曲酸抑制力最强，其抑制中浓度15。为36.71ltg-ml-.曲酸对 该酶活力的抑制动力学研究表明，该化合物是典型的可逆竞争型抑制剂，抑制常数K.=3.55pg-ml-, 关键词:甜菜夜蛾;多酚氧化酶;酶学特性;抑制动力学 CharacteristicsandKineticsofInhibitionofPolyphenolOxidasefrom Spodopteraexigua(Lepidoptera:Noctuidae) GAOXing-xiang,LUOWan-chun,XIEGui-ying,XUEChao-bin,DINGQi (ShandongKeyLaboratoryofPesticideToxicologyandApplicationTechnique,ShandongAgriculturalUniversity,Taian271018) Abstract:Thekineticcharacteristicsofpolyphenoloxidase(PPO)from助odopteraexigua(Hbner),aimportant insectinhorticulture,werestudiedaftertheenzymewaspartiallypurifiedby40%saturated(NH4)2SO4andSephadexG-100 gelfiltration.Theresultsshowedthattheactivityofenzymeincreasedby8.56foldsafterpurification.TheoptimumpH was6.5,thebestworkingtemperaturewas40`C,andtheMichaelisconstant(K)was10.73mmo1-LforthetestedPPOwith thesubstratecatechol.Theeffectsof5compoundsasinhibitorsofthereactioncatalyzedbytheenzymewerealsotested. Thoseresultsindicatedthatkojicacidwasthestrongestinhibitor(I5o36.71pg.ml-)withK=3.55pg.ml-amongthem,and rutinwastheworseinthetestedcompounds. Keywords:Spodopteraexigua;Polyphenoloxidase;Characteristics;Inhibitionkinetics 昆虫在其一生中要经历几次蜕皮。初生的新表 合理途径，其中 “酪氨酸酶 (即多酚氧化酶)抑 皮是柔软的、色淡的，后来经过硬化和黑化过程才 制剂”和 “靴化过程抑制剂”名列前茅 〔“〕。曲酸 得以坚硬川。多酚氧化酶(polyphenoloxidase, (kojicacid)是微生物生长过程中经糖代谢产生的 PPO)是这一黑化硬化过程中的关键性酶，它能够催 一种弱酸性化合物，有酪氨酸酶抑制能力、抑菌能 化单酚轻基化为二酚(如L-DOPA)，