骨髓间充质干细胞在糖尿病在鼠体内分布及疗效的研究.pdfVIP

江苏省第五次胰腺外科学术会议·大会交流 骨髓间充质干细胞在糖尿病在 鼠体内分布及疗效的研究 陆玉华王志伟 朱铭岩 陈玉泉 南通大学附属医院肝胆外科(226001) 前 言 骨髓间充质干细胞(MSCs)是一种具有多分化潜能的成体干细胞，由于具有许多的优点，使其成为 治疗多种疾病的理想的种子细胞，在体外能够被转化为胰岛素分泌细胞，当其被移植到糖尿病动物体内 归巢到哪些器官，对糖尿病是否有治疗作用，我们将对此进行研究。 一、材料和方法 1实验材料 氨酰氨、青霉素、链霉素(Sigma公司)，其余试剂为进口分装或国产分析纯。 2实验方法 2．1小鼠骨髓间充质干细胞的体外分离、原代培养扩增，同前期发表的文章。 2．2糖尿病小鼠模型的制备 7mmoL／L三天并出现多饮多尿症状的则造模成功。 2．3MSCs移植 实验动物分组 第一组：尾静脉移植CFP—mMSCs糖尿病模型组(n=lO)groupl 第二组：尾静脉移植GFP—mMSCs正常小鼠组(n=lO)group2 第三组：尾静脉注射PBS的糖尿病模型组(n=10)group3 SIX注射后3天糖尿病模型稳定，第一、二组分别从每只小鼠尾静脉注入浓度为1．7一1．9×104 +／斗lOFP—mMSCs150山，第三组从尾静脉注入150vdPBS液。 2．4观察指标 、 移植后观察小鼠的一般情况，体重变化和尿量变化，每周尾静脉取血监测小鼠的空腹血糖变化。待 细胞移植后1月，处死小鼠前心脏取血测胰岛素水平，颈椎脱臼法将实验组及对照组所有小鼠处死。迅 速取出心脏、肺脏、肝脏、胰腺、肾脏组织取出，即刻分别行连续冰冻切片，片厚为10urn，细胞核予以DA． PI染色，荧光显微镜下观察观察GFP—mMSCs在主要组织器官的分布情况。 2．5统计学分析 所得实验数据用均数±标准差(±s)表示，两组比较采用STATA7．0软件做t检验分析。 =、结果 1．小鼠的骨髓问充质干细胞的培养(图2A)及其生物学特性，已在先期文章发表 2．糖尿病小鼠模型的建立 ·154· 江苏省第五次胰腺外科学术会议·大会交流 mmoL／L 注射STZ前，每组小鼠的平均空腹血糖为5．32 4-0．62SD，注射后3天，小鼠的血糖逐渐开 开始进行细胞移植。 3．移植后动物生理指标观察 3．1血糖的变化 mmoL／L 移植前Gl、G3组小鼠血糖浓度为16．7mmol／L±0．83SD，G2血糖为5．324-0．65SD；移植 mmol／L 后9天Gl、G3组血糖平行升高，达18．5mmol／L±O．87SD；至第16天，G1血糖升高至峰值22．2 4-0．91SD，并且有一只小鼠死亡，而G3组升高的幅度较Gl明显大，达到25．3mmoL／L±O．92SD，且有2 mmoL／L 只小鼠死亡；此后，Gl组血糖逐渐下降而G3组血糖持续升高，至第30天。G1组血糖降至17．1 ±O．91SD，无小鼠死亡，而G3组血糖升至29．9 次死亡1只小鼠；而G2组血糖始终处于正常水平。移植前后相比，移植MSCs的糖尿病模型组G1经过 血糖升高后恢复至移植时的水平，无统计学差异，而注射PBS液的糖尿病模型组G3血糖持续升高，移 植前后有统计学差异(PO．05)，而移植MSCs的非糖尿病模型组G2移植前后的血糖无统计学差异。 3．2血清胰岛素浓度 移植后30天，在处死小鼠前取足够的血液测血清胰岛素水平：G2组处于正常水平为1．58烬,／L± 计学差异(PO．001)，但仍未能恢复至G2的水平，两者有统计学差异(P0．001)。 3．3体重变化 移植后体重变化：移植时各组体重为22．5