四氧化三铁纳米磁珠富集磷酸化多肽的研究.pdfVIP

中国化学会第十六届有机分析与生物分析学术研讨会论文集 四氧化三铁纳米磁珠富集磷酸化多肽的研究 付洁英，胡雪娇 农药与化学生物学教育部重点实验室 华中师范大学化学学院 武汉 湖北 中国 430079 fjy.159@163.com 摘 要：蛋白质的可逆磷酸化具有重要的生物学意义，但由于蛋白质磷酸化的丰度低以及磷 酸化的肽段离子化效率低，我们旨在利用四氧化三铁磁性纳米材料对磷酸化肽段的特异性吸 附，构建一个快速，高效鉴定分析磷酸化蛋白的新技术。 关键词：磁珠；磷酸化多肽；富集；质谱 中图分类号：O657.63 蛋白质磷酸化和去磷酸化几乎调节着生命活 磷酸化多肽含量极低在大量的非磷酸化肽段中被 动的整个过程，包括细胞的增殖、发育和分化，神 掩盖通过质谱几乎检测不到信号；Fe O 富集之后磷 3 4 经活动，肌肉收缩，新陈代谢，肿瘤发生等。对蛋 酸化肽段信号明显增强，大量的非磷酸化肽段消 白质磷酸化位点进行分析有助于阐明蛋白质磷酸 失，质谱图中信号高的多肽几乎都是磷酸化的肽 化的机制与功能。生物质谱是目前进行蛋白质磷酸 段，尤其是1660，1952等磷酸化肽段信号很高。可 化分析最有力的方法之一，但由于细胞内蛋白质磷 见通过纳米Fe O 磁珠可高效富集磷酸化肽段。 3 4 酸化的丰度很低以及在质谱分析中磷酸化的肽段 （2 ）实际生物样品富集条件的优化 离子化效率低，磷酸化肽段的质谱信号会被非磷酸 由于实际生物样品中经常使用大量的裂解液 化肽的质谱信号压制，因此在磷酸化蛋白的质谱分 裂解细胞和使用DTT 、IAM 等处理蛋白溶液，这些 析鉴定前，需要结合高效的富集技术才能提高信噪 试剂对质谱信号容易产生干扰，因此我们分别以 比。 LYOO6 、0.1%SDS 水溶液和含DTT 、IAM 的水溶 1 仪器与方法 液为溶剂，对酪蛋白进行酶解，并且对富集条件如 SYNAPT Q2 MALDI-Q-TOF waters 质谱仪； 富集时间，洗涤磁珠次数及洗脱时间等条件进行优 NH HCO (分析纯) ；ACN(LC-MS) ；TFA(LC-MS) ； 化，从而得到满意结果。 4 3 water(LC-MS) ；(NH )PO ,trypsin(promega)。 4 4 试验方法： 参考文献： 酪蛋白酶解 50% CAN/ 1%TFA 酸化 [1] Martijn W.H. Pinkse, Albert J.R. Heck*. Enrichment 磁珠吸附10min 洗涤磁珠 洗脱 strategies in phosphoproteomics. Drug Discovery Today: