一种基于单核苷酸多态性位点的定量检测异基因造血干细胞移植后嵌合率的新方法.pdfVIP

· 92· 生 月笫3l卷第2期 ChinJHematol，February2010．V01．31．N0．2 · 论 著 · 一 种基于单核苷酸多态性位点的定量检测 异基因造血干细胞移植后嵌合率的新方法 邵宇 王健民 龚胜兰 蔡在龙 章卫平 宋献民 王利平 【摘要】 目的 建立一种单核苷酸多态性一聚合酶链反应 (SNP—PCR)定量检测异基 因造血干细 胞移植后供受嵌合率的新方法，探讨其可行性 、准确性及优越性。方法 利用 18个SNP位点筛选移 植前每一对供、受者，采用实时定量PCR(RQ—PCR)对筛选出的差异位点行嵌合率定量分析，通过倍比 稀释、模拟嵌合与微卫星重复序列一PCR(STR-PCR)、性染色体双色荧光原位杂交 (XY．FISH)和融合基 因的定量检测，比较、验证方法的准确性及敏感度。结果 ①利用内参质粒标准品扩增的l7次标准曲 线 ，平均斜率为一3．39，平均截距为39．97，相关系数均 0．995，扩增效率接近理想水平；批内差及批 问差分别为0．50％和 1．10％，在可控范围；与模拟混合嵌合相关系数在0．99以上；可重复敏感度达 0．01％。(星)40例移植患者中，95％以上可以筛选出供、受者差异SNP位点；SNP—PCR与STR—PCR结果 吻合率达96．7％，与XY—FISH结果比较差异无统计学意义(P0．05)；SNP—PCR与特定白血病融合基 因检测结果比较，完全嵌合 (CC)标本均未检出肿瘤相关的融合基因，部分嵌合 (MC)标本融合基因均 为阳性。结论 SNP—PCR检测嵌合率准确、敏感 、易行，具有极高的临床应用前景，克服了STR—PCR竞 争抑制及扩增平台期偏倚的缺点，可以替代其进行临床常规检测。 【关键词】 造血干细胞移植 ；嵌合体； 多态性，单核苷酸； 聚合酶链反应 A novelsinglenucleotidepolymorphism-basedmethodforquantitativeassessmentofchimerism after allogeneicstem celltransplantation SHAO Yu， ⅣG Jian—min，GONG Sheng—lan，CAIZai—long， ZHANGWei-ping，SONGXian—min， ⅣGLi-ping．DepartmentofHematology，ChangHaiHospital， e SecondMilitaryMedicalUniversity．Shanghai 2oo433．China Correspondingauthor：WANGJian—min，Email：jmwangch@hotmail．corn A【bstract】 Objective Todevelopanovelsinglenucleotidepolymorphism (SNP)一PCRbasedmeth— odforquantitativedetectionofchimerismafterallogeneichaemopoieticstemeelltransplantation(allo—HSCT)， andtoexploreitsfeasibility．accuracyandsuperiority．Methods 18SNPlociwerescreenedtoidentifyin— formativemarkersfordetectingchimerism ineachdonor／recipientpairbeforetransplantation．Thenthechim— erismrateofeachinformativemarkerwasanalyzedbyreal—timequantitativePCR fRQ—PCR)．Theaccuracy andsensitivitywereverifiedbymultipleproportiondilutionandanalogychimerism comparedwithquantitative detectionofshorttandem repeat(STR)一PCR．fluorescenceinsituhybridization (FISH)andfusiongene． Results (1)