利用稳定转染细胞模型研究RIG—G基因的生物学功能.pdfVIP

维普资讯 中华血液坐 志2007年 l2月第28卷第 l2期 ChinJHemato1．December2007．Vo1．28．No．12 · 795 · · 论 著 · 利用稳定转染细胞模型研究 RIG—G基因的生物学功能 肖澍 贾培敏 宋满根 李冬 潘晓蓉 陈竺 童建华 【摘要】 目的 通过建立稳定表达 RIG-G蛋白的细胞模型研究RIG-G基因的生物学功能。方法 利用 ，I-off表达系统在 U937细胞中转人外源的RIG．G基因并诱导其表达；比较RIG．G基因表达前 后细胞生长、形态、细胞周期的分布和表面分化抗原以及相关细胞周期调控蛋白水平的变化。结果 RIG-G蛋白可通过上调细胞周期抑制因子P21和P27的蛋白水平，将细胞阻滞在G。／G．期。与转染空 质粒对照细胞相比，G。／G 期细胞的比例由(43．9±5．6)％增加到 (63．9±2．3)％ (P0．O1)，细胞的 生长被抑制，抑制率达到 (68．7±0．2)％。此外，RIG-G蛋 白还能使细胞表面分化抗原 CD11C的表达 升高至(61．3±1．1)％，细胞出现胞体变小、核浆 比缩小、核凹陷、染色质变粗糙等部分分化的形态特 征。而对照细胞的CD11C表达则为 (18．0±0．4)％ (P0．O1)。结论 RIG-G蛋 白具有重要的抑制 细胞增殖和促进细胞分化的能力。 【关键词】 基因，RIG．G；Tet．off表达系统； 细胞增殖；细胞分化 Utilization ofthestableectopicexpression ceH lineasamodelfortheinvestigationofRIG-G gene function XIAOShu，JIAPei-min，SONGMan-gen，LIDong，PAN Xiao-rong，CHEN Zhu，TONGJian- hua ． ShanghaiInstituteofHematology，RuijinHospital，ShanghaiJiaotongUniversitySchoolofMedicine， Sha nghai 200025，China Correspondingauthor：TONGJian-hua，Email：jhtong@yahoo．corn A【bstract】 Objective ToinvestigatethebiologicalfunctionofRIG-Ggenebyestablishingacellline stbalyexpressingRIG-G protein．Methods EctopicRIG-G genewastransfectedintoU937cellsbyusing Tet-offexpressionsystem．ChangesbeforeandafterRIG-Gexpressionweredetectedforcellgrowth，cellmor- phology，cellsurfacenatigenna dcellcycleregulatingproteins．Results RIG-G proteinarrestedthecellsat Go／G1phasenadinhibitedcellgrowthbyincreasingthecellcycleinhibitorsP21nadP27．Ascomparedto thatincontrolgroup，theproportionofcellsatGo／G1phaseinRIG-G-expressingcell groupincreasedfrom (43．9±5．6)％ to(63．9±2．3)％ (P0．O1)．TherateofgrowthinhibitionWas (68．7±0．2)％．Inad- dition，anincreaseinCD11Cexpression[(61．3±1．1)％ VS(18．0±0．4)％(P0．O1)]nadincells withmorphologicfeaturesofpartialdifferentiation(sma1]ercellsize，reducednucleus-c