异种生物骨衍生材料与大鼠骨髓基质细胞黏附体外实验的研究.pdfVIP

广 西 医 科 大 学 学 报 JOURNALOFGUANGXIMEDICALUNIVERSITY 2007Oct；24(5) RSI 异种生物骨衍生材料与大鼠骨髓基质细胞黏附的体外实验研究 花奇凯 赵劲民△ (广西医科大学第一附属医院创伤骨科、手外科 南宁 530021) 摘要 目的：探寻 良好 的骨组织工程支架材料 。方法 ：以新西兰大白兔的四肢长骨制备一种生物骨衍生材料 ，将此材料与大 鼠 骨髓基质细胞(BMSCs)联合培养，通过光镜及 电镜对联合培养过程进行动态观察。结果：生物骨衍生材料具有三维立体多孔 隙结构，并有 良好 的生物相容性和材料一细胞界面。结论 ：异种生物骨衍生材料是一种有临床应用前景，适用于组织工程骨构 建的支架材料。 关键词 骨组织工程 ；支架材料 ；生物骨衍生材料 中国图书资料分类法分类号 R336 各种原因造成骨缺损、骨不连 的治疗一直是骨科 的难题 构存在 。 之一。骨组织工程利用组织工程的原理和方法制备组织工 2．2 所分离提纯的BMSCs经培养后呈成纤维细胞样生长 ， 程骨组织，为骨缺损、骨不连 的治疗提供 了全新 的修 复方 细胞轮廓清晰，细胞质折光性好 ，逐渐形成细胞集落 ，表现 出 法r]]。本实验从探寻 良好 的骨组织工程支架材料 的 目的出 骨髓基质细胞 的生长特点且生长力旺盛 。 发，拟制备一种生物骨衍生材料 ，将此材料与大 鼠骨髓基质 2．3 BMSCs在生物骨衍生材料上黏附情况：倒置显微镜观 细胞 (BMSCs)联合培养 ，通过光镜及 电镜对联合培养过程进 察 ：联合培养第 3天可见细胞从生物骨衍生材料 向外长 出， 行动态观察，了解该材料与 BMSCs的生物相容性及黏附情 尤其 向骨粒方 向延伸显著 。随培养时间延长 ，板 内细胞进一 况 ，寻找一种有临床应用前景，适用于组织工程骨构建 的支 步增多 ，并与骨粒上长 出的细胞连接成片 (图 1)。扫描 电镜 架材料 。 观察 ：生物骨衍生材料表面粗糙 ，可见大小不等 的裂隙与微 孑L。细胞贴附于骨粒表面 ，或 向裂 隙或微孑L内生长 。细胞为 1 材料与方法 梭形或多边形，其表面有丝状突起 (图2)。 1．1 实验材料 ：实验用成年新西兰大 白兔、成年 SD大 鼠均 由广西医科大学实验动物 中心提供 。取兔四肢长骨经脱脂、 脱蛋 白制成异种生物骨衍生骨支架材料 ，经环氧乙烷消毒 后 ，一80℃深低温冰箱保存备用 。BMSCs取 SD大 鼠骨髓 ， 经分离、提纯、扩增后备用 。 1．2 实验方法 ：以改 良的过氧化氢、乙醚法对成年新西兰大 白兔四肢长骨经脱脂、脱蛋 白处理制成生物衍生骨支架材料 骨条 ，消毒并一80℃冻存。使用 Percol1分离液密度梯度离 心分离 BMSCs，在含 l0％小牛血清 的低糖 DMEM 培养液 中，置于 37℃，5 COz培养箱 内进行体外培养 ，保留贴壁细 胞传代 ，至第 5代时，以胰蛋 白酶消化细胞后吹打制成细胞 悬液 ，调整细胞数量约为 1×10 ／m!。将细胞悬液滴入预先 图 1 联合培养后第 l0天 (×200) 制好 的生物骨衍生材料粗糙面上 ，使之充分渗入 。加入 10 小牛血清DMEM培养液进行联合培养。通过光镜及 电镜对 联合培养过程进行连续观察，了解该材料与BMSCs的相容 性及黏附情况 。 2 结 果 2．1 扫描 电镜观察 (SEM)可见生物衍生骨材料具有原骨组 织的网状孑L隙结构系统，其原骨组织骨盐支架 的三维多孑L结 *广西壮族 自治区卫生厅重点科研课题 (桂卫重 200636) △通讯作者 ：E-mail：zhaojinmin@126．com 收稿