猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白C端主要抗原表位区的原核表达.pdfVIP

动物医学进展 。2010，31(1)：24—27 ProgressinVeterinaryM edicine 猪戊型肝炎病毒 !一itFi2蛋白C端主要抗原表位 区的原核表达 冉旭华，闻晓波 ，王 密，李冬野，侯喜林 (黑龙江八一农垦大学动物科技学院 预防兽医学省重点实验室，黑龙江大庆 163319) 摘 要：利用分子生物学软件分析 GenBank公布的猪戊型肝炎病毒 DQl株 ORF2的氨基酸序列，确定 了其 C端抗原性较高的区域 ，针对此区域设计并合成 了一对特异性引物 ，RT—PCR扩增该区域 ，并将此片段 克隆到原核表达载体 pET30a(+)上 ，命名为 pET30a-ORF2C，然后转化大肠埃希茵 BI2l感受态细胞， 1．0mmol／IIPTG37℃诱导表达。结果表明，RT—PCR扩增得到 3O1hp的片段，重组蛋 白大小约为l8ku， 与预期大小相符。Westernblot分析表明，该蛋白与阳性血清发生特异性反应，为进一步利用其建立诊断方 法奠定 了基础 。 关键词：猪戊型肝炎病毒 ；ORF2；主要抗原表位 区；表达 中图分类号：Q786；$852．659．6 文献标识码 ：A 文章编号：1007—5038(2010)01—0024—04 戊型肝炎(HepatitisE，HE)是 由戊型肝炎病 作为诊断抗原建立检测方法奠定基础。 毒(HepatitisEvirus，HEV)引起的、经消化道传播 1 材料与方法 的急性病毒性肝炎，其临床表现为发热、食欲不振、 1．1 材料 恶心、呕吐、尿色深黄、常见黄疸，病程可持续 1周， 1．1．1 病料、阳性血清和栽体 病料采 自大庆地区 但具有 自限性L1]。该病主要发生于卫生条件较差的 的 1月龄～3月龄仔猪粪便；阳性血清、pMD18一T载 发展 中国家。HEV可在多种动物体内分离到，1997 体、pET30a(+)载体、大肠埃希菌 TG1、BL21由黑 年美 国发现 了猪戊型肝炎病毒，且与人 HEV具有 龙江八一农垦大学动物科技学院预防兽医学省重点 较高的同源性，随后证实其为一种人畜共患病病原， 实验室保存供用 ；BI21(DE3)pLysS购 自Novagen 因其具有重要的公共卫生意义而备受重视L2J。 公司。 猪戊 型肝 炎病毒 (SwinehepatitisEvirus， 1．1．2 酶和试剂 ExTaqDNA 聚合酶 、BamH SHEV)属杯状病毒科，为无囊膜 的单股正链 RNA I、HindⅢ、DNAMarker(DL2000)购 自宝生物工 病毒 ，直径 27nm～32nm，表面粗糙 ，呈不规则球 程 (大连)有 限公司；鼠源反转录酶购 自MBIFer— 形。基因组全长约为7．2kb～7．6kb，5端有27bp mentas；RNA酶抑制剂、TrizolRNA提取试剂盒购 的非编码区，基因组编码 3个开放阅读框架 ORF1、 自Invitrogen公司；特异性 引物 由上海生工生物工 ORF2和 ORF3]。ORF1编码与病毒 复制有关 程技术服务有限公司合成；胶 回收试剂盒购 自上海 RNA依赖性 RNA聚合酶；ORF2编码病毒的衣壳