肝细胞生长因子受体的shRNA抑制胶质瘤生长的体内外研究.pdfVIP

实用医学杂志2lo 第 26鲞箜 inducingdrugtreatment[J]．JNeuroseiMeth，1997，78(1-2)：133— [J]．中国矫形外科杂志，200812(8)：599—601，612． 137． [10]MagnaghiV，VeigaS，BallabioM，eta1．Sex-dimorphiceffectsof [8] VroemenM ，WeidnerN．PurificationofSchwanncellsbyselection progesterone and its reduced metabolites on gene expression of ofp75low affinitynervegrowthfactorreceptorexpressingcellsfrom myelinproteinsbyratSchwanncells[J1．JPeriphNervSys，2OO6， adultperipheralnerve[J]．JNeurosciMeth，2003，142(2)：135- 11(2)：l11—118． 143． (收稿：2009—06—08 编辑 ：王耀东) [9] 黄明，罗卓荆．免疫磁珠法分离和提纯雪旺细胞 的实验研究 肝细胞生长因子受体的shRNA抑制胶质瘤 生长的体 内外研究 楚胜华 冯东福 马延斌 摘要 目的：探讨肝细胞生长因子受体 (c—metprotooncogene，c—Met)的RNA干涉(RNAi)技术在体 内外对U251 细胞生长抑制作用。方法：PCR法获得人 u6启动子及带有c—Met反向互补靶序列的片段HU6shmet；利用腺病毒载 体将其传递至U251细胞 ：应用MTT法、流式细胞术和Matrigel基质生长实验评价肿瘤细胞转导前后的生物学行 为。进一步应用裸 鼠皮下荷瘤模型观察腺病毒载体介导shRNA基因治疗对U251细胞生长的抑制作用。对肿瘤组 织应用免疫组化的方法进行 c—Met和增殖细胞核抗原(PCNA)表达 比较。结果：MTT法分析显示 rAdUshmet2转导 组细胞生长抑制率为70％：与对照组和rAdUsicon转导组比较，细胞周期分析结果表明rAdUshmet2转导纽G0～Gl 期细胞数没有明显变化，进入S期的细胞数较对照组减少了l2．6％～12．9％，而进入G：期细胞则增加了10．6％一 l1．8％。Matrigel基质生长实验显示对照组和rAdUsicon转导组细胞呈正常形态贴壁生长．而rAdUshmet2转导组 细胞不能贴壁生长，呈团块状簇集生长。裸鼠皮下荷瘤模型实验显示rAdUshmet2显著抑制皮下肿瘤生长。组织 病理学分析显示治疗组c—Met表达下降、PCNA标记指数降低 结论：靶 向c—Met的RNAi技术在体内外对 U251 细胞生长均产生明显抑制作用。因此，shRNA表达腺病毒载体介导的基 因治疗可以成为胶质瘤靶 向性 c．Met治 疗的新策略。 关键词 神经胶质瘤： 肝细胞生长因子受体； 腺病毒； RNA干扰 ； 增殖 笔者的前期研究表明，肝细胞生长因子(HGF)及 合成 以及细胞培 养和基 因转导 靶 向 c．Met的 其受体 (c—Met)在胶质瘤中呈高表达，并与胶质瘤增 shRNA表达载体的靶序列选择与合成以及U251恶性 殖、侵袭性生长密切相关 l【_2]。本研究将探讨靶向C— 胶质瘤体外细胞系培养与转导方法见文献 [3]。设 Met的RNA干涉(RNAi)技术在体 内外对 U251细胞 rAdUshmet2转导组和 rAdUsicon转导组．以U251细 生长的抑制作用。 胞为亲本阴性对照。 1 材料与方法