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动物医学进展 。2010，31(6)：5—10
ProgressinVeterinaryM edicine
南阳牛 BoLA—DRA基 因的克隆
及其在大肠埃希菌中的表达
楚秋霞 ，徐照学 ，施巧婷。，陆涛峰 ，张彦明
(1．西北农林科技大学动物医学院，陕西杨陵 712100；2．河南省农业科学院畜牧兽医研究所 ，河南郑州 450002)
摘 要：为克隆南阳牛BoLA—DRA基因，构建原核表达载体并研究该基因在大肠埃希菌中的表达。从
南阳牛脾脏组织 中提取 总RNA，利用 RT-PCR方法扩增得到 BoLA—DRA 基 因，将其克隆至 pGEM—Teasy
克隆载体上，转化感受态细胞 DH 5a，经测序鉴定后 ，进一步亚克隆至原核表达载体 pGEX_4T_1中，构建 出
重组表达质粒 ，经 IPTG诱导表达。结果表 明，本试验成功克隆了大小为 917bp的BoLA—DRA基 因，重组
质粒 pGEX一4T—DRA在大肠埃希茵中以包涵体形式表达 ，表达产物经SD PAGE和Westernblot鉴定大小
为 54．4ku，与预期结果一致 。为进一步研 究该蛋 白的功能及制备抗体奠定了基础。
关键词：南阳牛 ；BoLA—DRA；pGEX-4T—l；原核表达
中图分类号 ：Q785 文献标识码 ：A 文章编号 ：10O7—5O38(2OlO)O6一OOO5一O6
主要组织相容性复合体 (majorhistocompati— 锁并呈单体型遗传 的基 因家族 ，根据基 因产物结构
bilitycomplex，MHC)是高度多态 、紧密不平衡连 和功能的不 同分 3类基 因[ 。其中，I类抗原在 T
收稿 日期 ：2010-03-02
基金项 目：国家十一五科技支撑计划项 目(20O8BADB2BO3—03)；国家863计划项 目(2008AA1O1010)
作者简介 ：楚秋 霞(1982一)，女，河南许 昌人 ，，硕士研究生，主要从事分子病原学与免疫学研究。*通讯作者
Elo3 HarmsPA，HalburPG，SordenSD．Threecasesofporcine (2)：216-219．
respiratorydiseasecomplexassociatedwithporcinecircovirus [12] 韩 勇．应用多重方法检测猪伪狂犬病毒、细小病毒和圆环病
type2infectionfJ~．SwineHealthProd，2002，10：27—30． 毒 2型[D]．河南郑州：河南农业大学，2007．
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联PCR检测方法的建立 [J]．中国预防兽医学报，2006，28 京：科学出版社，2005：698—699．
EstablishmentandApplicationofDuplex
PCR forPRRSV andPCV一2Detection
W ANG Lin ，W U Fa—xing。，W U Mei—qin。，GAO Xu—lei一，LIPing”，
ZHU Zi—xiang。 ，ZHANG Yan—xia ，ZHANG Zhi。，LIXiao—cheng ，SHAN Hu
(1．QingdaoAgricultureUniversity，Qingdao，Shandong，266109，，China；
2．ChinaAnimalHealthAndEpidemiologyCenter，Qingdao，Shandong，266032，China；
3．ZhaoyuanMunicipalAnimalHusbandry Bureau，Yantai，Shandong，265400，China；
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