小鼠胚胎干细胞定向分化为神经细胞的研究进展.docVIP

小鼠胚胎干细胞定向分化为神经细胞的研究进展 【摘要】小鼠胚胎干细胞（ebrynisteell,ESell）体外培养可以分化外胚层组织，并分化为神经元和神经胶质细胞。细胞已用于中枢神经系统疾病的细胞替代治疗和治疗药物的研发。小鼠胚胎干细胞定向分化为神经细胞的方法… 【摘要】 小鼠胚胎干细胞（ebryni ste ell , ES ell）体外培养可以分化外胚层组织，并分化为神经元和神经胶质细胞。细胞已用于中枢神经系统疾病的细胞替代治疗和治疗药物的研发。小鼠胚胎干细胞定向分化为神经细胞的方法主要有拟胚体介导的神经细胞分化、基质细胞诱导的神经细胞分化、默认模式介导的神经细胞分化、单层粘附培养诱导的神经细胞分化和遗传工程介导的神经细胞分化等。本文综述了分化方法。 【关键词】 胚胎干细胞; 神经细胞; 分化 Prgress in direted differentiatin f use ebryni ste ells int neural ells 【Abstrat】 use ebryni ste ells an give rise t etderal derivatives in ulture and an be further indued int neurns and glia fr ell-replaeent therapies in the entral nervus syste and fr use in drug disvery. The ethds f direted differentiatin f use ebryni ste ells int neural ells inlude neural differentiatin fr ebryni ste ells via ebryid bdies, stral ell indued neural differentiatin, default del ediated neural differentiatin, adherent nulture indued neural differentiatin, geneti engineering ediated neural differentiatin and s n. Here e revie these ethdlgies. 【Key rds】 ebryni ste ell; neural ell; differentiatin 小鼠胚胎干细胞于1981年首次由Evans和Kaufan［1］分离建系，它们于胚泡的内细胞团（inner ell ass , I），细胞稳定的二倍体核型，在体外可以分化为三个胚层的多种细胞。将小鼠胚胎干细胞重新植入胚泡可以胚胎。体外ES细胞维持未分化状态依赖于细胞因子的，如白血病抑制因子（leukeia inhibitry fatr , LIF）［2］。撤去自我更新的刺激信号后，ES细胞很快分化为多种细胞。属性使ES细胞非常有用的发育生物学和功能基因组学的生物系统［3］。 1 拟胚体（ebryid bdies, EBs）内神经细胞的分化 小鼠ES细胞拟胚体分化为神经细胞主要有两种方案。 1.1 “4-/4+方案”［4］ 将小鼠ES细胞无LIF培养4天，EB；再用维甲酸（retini aid, RA）4天，然后在明胶（gelatin）［5］或层粘连蛋白（lainin）［4］包被的组织培养皿上培养［6］。培养6天后，细胞的神经细胞形态，开始表达神经细胞特异的基因，如神经微丝轻链（neurfilaent light hain）、微管蛋白2和5（AP2、AP5）等。细胞对一系列神经递质和去极化电流起反应，证实了它们是可以传递兴奋的神经元。方案还会分化出神经胶质细胞，多数为星形胶质细胞，但也有少突胶质细胞的［7］。RA是一类促神经生长因子，对多潜能干细胞有诱导作用，对神经前体细胞也有增殖、成熟的作用。RA与受体RAR、RXR，后者活化后与RA反应元件（RARE），激活神经细胞基因并抑制中胚层基因的转录［8］。iles 等人的实验表明RA激活抑胰蛋白（fllistatin）抑制骨形态蛋白（bne rphgeneti prtein, BP）而使小鼠ES细胞向神经细胞方向分化［9］。 该方案短、成本低，是使用较为的神经细胞诱导方法。其之处是EB的外层细胞先分化而内层细胞仍未分化状态, 分化不均一，的细胞种类，不利于纯化。 1.2 “五步法”方案［10］ (1)扩增未分化的胚胎干细胞；(2)去除分化抑制剂或促有丝分裂素，ES细胞开始分化，不贴壁悬浮生长，EB；(3)去除生长因子，选择巢蛋白（nestin）阳性细胞（即神经前体细