HBVcccDNA检测技术进展.pdfVIP

逝堑亟堕匡堂呈Q!Q生筮丝鲞筮兰塑圣蛔i婴g堕幽垡翌丛竺尘旦i璺璺：堕翌兰Q!Q：塑丝：!坠至 ·19· ·综述· HBV cccDNA检测技术进展 齐雪芬1 徐益飞1综述陈保德2陈铲审校 中图分类号：R512．6+2文献标识码：A 文章编号：1007—0931(2010)05—0019—04 B 是乙肝病毒HBVmRNA和前基因组RNA合成的原 乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(hepatitis virus closed circular covalently DNA，HBVcccDNA)始模板u0|，以HBVcccDNA为模板合成的前基因组 B 是乙型肝炎病毒(hepatitisvires，HBV)复制的RNA在核内转录后转运至胞质，经组装进入由病毒 中间体，是HBVmRNA和前基因组RNA合成的模 核心蛋白及P蛋白组成的复合体内，逆转录合成 HBV 板¨吒J。在HBV生活周期中，HBVcccDNA的形成 DNA负链。前基因组RNA继而被降解，剩下 是关键的一步，是HBV持续感染的关键因素，也 rcDNA 负链作为模板合成正链DNA，新合成的HBV 是指导乙肝抗病毒治疗的重要依据[3“j。Southern 中正链大多不完整。含有此种HBVrcDNA的核衣壳 blot是检测HBVcccDNA的经典方法¨硝j，但其检 可以包装进病毒包膜，转运出细胞成为成熟的病毒 测过程复杂，技术要求高，操作可控性差，且灵敏 颗粒，也可在胞质内脱壳，转运至核内，补充HBV 度不高。为了提高HBVeccDNA检测的灵敏度和特 cccDNA的量。通过包膜蛋白的反馈抑制作用及肝细 异性，研究者开发了多种分子生物学检测方法，尤 胞周期的循环等机制，HBVeceDNA在被感染的肝细 其是聚合酶链反应(PCR)技术。卜81，但由于 胞内保持一个动态平衡水平，形成一个HBV HBV cccDNA在细胞内的含量较低及同源DNA的 cccDNA池。 干扰，其检测结果不是很理想。近年来，荧光定量 PCR技术极大的提高了HBVcccDNA检测的灵敏 cccDNA检测的分子基础 度和特异性，而新的荧光探针和荧光引物技术使准 乙肝病毒在一个完整的生活周期中有多种同源 确检测HBVcccDNA成为可能。 rcDNA、ssDNA、整合的HBVDNA等)，其中 HBV基因组结构及cccDNA的形成 eccDNA的半衰期约为33—57d【】¨，每个肝细胞中 细胞外乙型肝炎病毒DNA是一种松弛环状的双 circular 链DNA(relaxedDNA，rcDNA)分子，其两 毒DNA存在的主要形式；ssDNA是乙肝病毒复制 条链均不闭合，其中负链较长，约3200个碱基，含 过程中形成的单链DNA；整合的HBVDNA是部分 有乙肝病毒基因组的全长基因，在其5’起始端与