日本血吸虫重组IAP蛋白的免疫保护效果评估.pdfVIP

中国动物传染病学报 2014，22(3)：34—40 ChineseJourna1ofAnimalInfectiousDiseases · 研究论文 · 日本血吸虫重组 lAP蛋白的免疫保护效果评估 胡超，罗 荣，刀金威，王宇清，赵江平，陆珂，李浩，刘金明，程国锋 (中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海 200241) 摘 要 ：为研究 日本血吸虫凋亡蛋白抑制因子 (inhibitorofapoptosisproteinofSchistosomajaponicum，SjIAP)重组蛋白诱导 BALB／c小鼠的免疫保护效果，利用PCR技术扩增SjlAP基因，构建重组表达质粒pET-28a(+)-SjIAP，诱导表达重组SjlAP蛋白， 并利用重组蛋白制备兔源多克隆抗体血清。然后，选用SjIAP重组蛋白免疫BALB／c小鼠，利用ELISA检测免疫小鼠血清中的 特异性抗体水平，以及免疫小鼠脾脏淋巴细胞在 SjIAP重组蛋 白刺激后产生的细胞因子水平。强化免疫后，将小鼠进行血吸虫 尾蚴攻虫试验，感染38d，进行剖杀，计算虫体减虫率及肝脏减卵率。Westernblot结果表明本研究制备的兔源多抗血清能特 异性识别 SjIAP重组蛋 白。ELISA检测表 明免疫SjIAP重组蛋 白可诱导较 高水平的IgG及 IgG亚型 (IgG1、IgG2a、IgG2b、 IgG3)抗体和 IFN． 、IL一2及 IL．4细胞因子。动物试验表明，免疫SjIAP重组蛋白的小鼠与PBS组相比分别获得 了31．5％的 减虫率和 37．2％的肝脏减卵率。免疫 SjIAP重组蛋 白能诱导小鼠获得一定减虫和减卵保护效果，提示血吸虫凋亡蛋 白抑制因子 可作为抗血吸虫病的疫苗候选分子。 关键词：日本血吸虫；凋亡蛋白抑制因子；免疫保护 中图分类号：$852．735 文献标志码 ：A 文章编号：1674．6422(2014)03—0034—07 EVALUATIoN oFIM M UNoGENICITY oFTHE RECoM BINANT INHIBIToR oFAPOPTOSISPR0TEIN oF 4JA D INM oUSEM oDEL HU Chao，LUORong，DAOJin—wei，WANGYu．—qing，ZHAO Jiang—ping，LU Ke，LIHao， LIU Jin—ming．CHENG Guo—feng (KeyLaboratoryofAnimalParasitologyof砌PMinistryofAgriculture．ShanghaiVeterinaryResearchInstitute．CAAS,Shanghai 2oo24j．China) Abstract：ToevaluatetheprotectiveimmunityinducedbytheinhibitorofapoptosisproteinofSchistosomajaponicum (rSjlAP)in BALB／cmice，SjIAPgenewasamplifiedinPCRandsubclonedintotheplasmidpET-28a(+)tOconstructarecombinantexpression plasmidpET-28a(+)一SjIAP．TherecombinantproteinSjIAPwasexpressedinE．col1．Thepurifiedrecombinantproteinwasusedto immunizeNewZealandrabbittoproducepolyclonalantibodies．BALB／cmicewereimmunizedwiththepurifiedrecombinantsjlAP emulsifiedinFreund’Sadiuvant．Thelevelsofspecificanti．rSjIAPantibodiesinseurmsamplesofimmunizedanimalsandcytokinesin culturesupernatantsofthesp