第四部分+持续低剂量率照射CL187细胞MAPK信号转导通路研究的论文.pdfVIP

第四部分 87细胞 持续低剂量率照射C／1 MAPK信号转导通路研究 前言 细胞周期和凋亡的失控已明确是肿瘤发生发展的主要机制。诱导凋亡和阻断细胞周期是肿瘤治 疗的重要方式，而细胞周期的调节是通过信号转导实现的。酪氨酸激酶受体途径是最重要的信号转 导方式，而在酪氨酸激酶受体途径中当前研究最多的就是表皮生长因子受体。表皮生长因子受唪 186 factor EGFR)是一个由单一多肽链组成的跨膜糖蛋白。含有1 (epidermalgrowth receptor 个氨基酸残基，分子量170KD，由氨基端配体结合区，跨膜螺旋和胞浆氨基酸激酶组成¨。。’“。EGFR 在肿瘤的发生过程中起着非常重要的作用，EGFR的突变、过度表达、结构重排或正常功能的丧失 都会引起细胞分化和生长的异常。在结肠癌中，EGFR的表达对结肠癌预后有很大意义。EGFR受体 表达水平高的患者肿瘤恶性度和临床分期较高，发生转移和复发的危险度增加，无症状生存期和总 体生存期缩短，预后差∞“^引。而大约70％的结肠癌患者过度表达EGFR，这就是EGFR作为抗结肠 癌治疗靶点的理论基础旧’101。而将EGPR作为抗肿瘤靶点治疗策略之一就是用抗体阻断EGFR的结合 位点。这也正是我们研究的意义所在。 ～．材料与方法 (一)材料与试剂 CLl87人大肠癌细胞系 北京肿瘤所提供，购自ATCC 普通RPMI—1640培养液 Gibco分装 (含青霉素lOOILi／ml?链霉素 lOOmg／m1) 胰蛋白酶 中科院动物所 EDTA 中科院动物所 胎牛血清 杭州四季青公司 l：IOOEGFR鼠抗人单克隆抗体中山金桥生物有限公司 1：lOORas鼠抗人单克隆抗体 中山金桥生物有限公司 Cruz 1：50羊抗鼠FITC—IgG 美国Santa Cruz l：50兔抗羊FITC—I如 美国Santa 35mm培养皿 晶美公司 60mm培养皿 品美公司 lOOmm培养皿 品美公司 15ml培养瓶 品美公司 lml离心管 晶美公司 15ml离心管 北京四环’ 50ml离心管 北京四环 (二)主要仪器 1“5I放射源 宁波君安药业科技有限公司 CLDR放射生物学模型 北京大学第三医院 即CoY射线照射源 北京大学医学部钴源室 co：细胞培养箱 德国Heraeus z‘aeus 高速f氏温离心机 德国lle 冰箱 llaierBcd-238青岛海尔 一80℃冰箱 北京长安科学仪J。lg，，I-- 电热恒温水洛箱