淫羊藿苷对骨髓间充质干细胞表达锌指转录因子4研究.pdfVIP

第五届中国中医药实验动物科技交流会 淫羊藿苷对骨髓间充质干细胞表达锌指转录因子4的研究 邹移海 谢玲玲 (广州中医药大学实验动物中心，广州，510405) 时间组相比，各组在培养24h+IW时，GATA-4表达量最高。 GATA-4的表达， 【关键词】 骨髓间充质干细胞；淫羊藿苷： 锌指转录因子4 研究证实移植心肌细胞是治疗心梗的一个替代途径。目前有多种细胞可用于心肌细胞移植，因心 肌细胞是终末分化细胞，在体外很难扩增，在适当的条件下诱导干细胞分化为心肌细胞，为心梗的治疗 开拓了新的治疗手段21。 MSCs在体外的分化由外景环境，即诱导条件决定。现代研究结果表明多种药物、细胞因子、生长 因子等均可促使干细胞向心肌方向分化【1】’如三七、5．aza、丹酚酸B等。ICA是淫羊藿属植物药材的质量 标准控制特征成分，具有多种生物活性。ICA药理活性主要表现在改善心血管系统功能、增强机体免疫 力、促进DNA合成及诱导肿瘤细胞分化等方面。由于这类中药相对于其他诱导成分，安全性较高，逐 渐成为人们研究的重点。 1．材料 1．1主要仪器 倒置相差显微镜(日本Olympus)、涡旋振荡器(上海泸西分析仪器厂)、电热恒温水槽(上海一恒)、 Lovrmat)、彩色图像摄录输入仪(ⅥlberLovrmat)、全自动图像分析系统(VilberLovrmat)、Minj电泳 槽(amershem)、垂直板电泳转移装置。 1．2试剂和溶液的配置 1．2．I试剂 kit(TAKARA)o PrimeScript％FPCR 1．2．2溶液的配置 1．2．2．1 IMDM基础培养基的配制 l作者简介]邹移海(1950·)，男，教授，博士生导师，专业：中西医结合基础及实验动物学 l基金项目]丹酚酸B和淫羊藿苷对移植治疗大鼠心肌梗塞的影响．广东省产业技术研究与开发资金计划项目， 2008A060202018 382 第五届中国中医药实验动物科技交流会 用。 1．2．2．2磷酸盐缓冲液(PBS)的配制 取KCl0．2 g，NaCl8．0g，Na2HP04·12H202．89g，加超纯水至1000ml，磁力搅拌器 g，K／-12P040．2 搅拌均匀，调整pH值至7．4，分装后高压蒸汽灭菌20min，4C下保存各用。 1．2．2．3 0．25％胰蛋白酶-0．02％乙二胺四乙酸(EDTA)消化液配制 取EDTA0．02 g，胰蛋白酶0．25g，用PBS溶解后，·定容至100ml，经针头滤器除菌过滤后分装， ．20℃下保存备用。 2．方法 2．1MSCs的培养、诱导 略变圆，立即加入MSCs完全培养基终止消化，用吸管轻轻吹打，将细胞浓度调整为2．0×105个／mL接种 在六孔板内，每孔接种lml，每板接种6个孔，共接种12个板，按照不同诱导时间分为4个组：24h+Id组、 24h+lW组、48h+ld组、48h+lW组，每组3个板。 将培养板放入二氧化碳培养箱(37C、5％C02)内培养，分别在培养24h后取出，吸弃孔中培养液， 每个孔用PBS清洗3次。 吸弃孔中PBS。将每个培养板接种的细胞分为正常对照组、5．a．7,a组和4个浓度的ICA组。对照组每 (10—8M)、ICA4组(10母M)，每孔加入含相应浓度诱导药物的培养液各lml。 把培养板放回二氧化碳培养箱内，分别在第24h、48h后各取出6个板，将孔中含不同浓度诱导药物 的培养液换成完全培养基后继续培养，并分别在培养1d和1W后进行下一步实验。 2．2细胞总RNA的提取 将培养板取出，吸弃板中培养液，用PBS洗三次。按照试剂操作说明进行细胞总RNA的提取。 2．3引物(探针)设计序列如下所示： 引物 引物 扩增长 扩增 扩增片段C,-C含 基因名称 方向 引物序列 长度 度 温度 量 F 60 GATA4 TCTCCCCACAAGGCTATCCATI