猪附红细胞体体外培养影响因素地研究.pdfVIP

第六届理事会第二次会议蠢教学专业委员会2006年会议论文集 3．1 本试验以染色镜检和PCR检测均为阳性的猪血为标准阳性对照，均为阴性的猪血 为标准阴性对照，并首先以标准阳性和标准阴性血样进行间接免疫荧光试验，结果对照均成 立。临床检测结果显示用抗猪附红细胞体的单克隆抗体检测附红细胞体的免疫荧光试验与先 前所用PCR检测方法的结果基本一致，其特异性和可靠性较好，并验证了本实验室所建立 的PCR检测方法的正确性。 3．2血涂片染色镜检法常因感染率低、隐性感染或血液样本处理不当等因素而产生的 误诊，而IFAT法检测猪附红细胞体病特异性强、敏感性好【6】、与其它病原体不存在交叉 反应，而且该方法简单、快速，阳性、阴性样本差别显著，尤其使用了单克隆抗体后，特异 性更强。用单克隆抗体进行的间接免疫荧光试验检测猪附红细胞体比瑞氏和姬姆萨染色镜检 检出率高出近30个百分点，显示了其敏感性较好的优势。因此IFAT法作为一种检测猪附红 细胞体的方法，在对猪附红细胞体病的诊断、流行病学调查、治疗效果检查等方面具有广泛 的应用价值。 3．3本试验分别用0．01％的伊文思蓝和0．01mol／LPBS稀释荧光二抗，比较结果显示用伊 文思蓝稀释荧光二抗的效果较好，它可覆盖背景颜色，减弱非特异性发光的因素，使特异性 荧光的效果更为突出。 参考文献璐 猪附红细胞体体外培养影响因素的研究 张浩1’2，王永明¨，单虎1，吴延功2，朱绍辉1～，张灿1，秦晓冰1 (1．莱阳农学院动物科技学院，山东青岛2661092冲国动物卫生与流行病学中心，山东青岛266032 3．山东滨州华宏生物制品有限公司，山东滨州250100) 摘要：通过检测猪附红细胞体的红细胞感染率，研究不同抗凝剂、温度和培养基等对猪附红细胞体体外 培养的影响．结果表明：与柠檬酸钠和EDTA处理血液相比，含202／L葡萄糖的柠檬酸钠更有利于保持红 细胞感染率；与室温和3712培养相比，4C培养更有利于维持猪附红细胞体的红细胞感染率：与MEM和 M-199培养基相比，RPMI．1640可以得到更高的红细胞感染率，可迭84．1％．结论：血液用舍209／L葡萄 糖的柠檬酸蚋抗凝，4C培养和使用RPMl．1640培养基更有利于体外培养猪附红细胞体． 关键词：猪附红细胞体；体外培养；感染率 suis，EH)是由附红细胞体引起的人畜共患传染病，俗 猪附红细胞体病(Eperythozoon 称黄疸性贫血瘸、赤兽体病或红皮病等，本病以发热、贫血和怀孕母猪的流产为特征，也可 能和其他疾病混合感染，表现不同的交叉症状，该病治愈率较低，是严重影响养猪业的烈性 传染病之一，给养猪业造成了巨火的经济损失111。关于附红细胞体的体外培养，Smitht21等在 1990年首次利用感染红细胞与正常红细胞按一定比例混合后培养的方法培养猪附红细胞 体；NonakaTM等在1996年报道了猪附红细胞体的体外培养；张守发㈨在体外成功的培养了 牛附红细胞体；律祥君151等在2002年将感染猪全血与健康猪全血混合后在厌氧条件下培养 成功；房春林№J等对猪和兔附红细胞体进行了体外培养。本研究旨在建立～种高效的体外培 养猪附红细胞体的方法，并对影响附红细胞体感染率的因素做了研究，为进一步开展猪附红 细胞体生物学特性，免疫机理的研究，筛选有效药物，制备抗原及研制疫苗奠定基础。 1材料与方法： 1．1病原体 选择有明显贫m症状的猪，无菌取其抗凝血，压片、镜检，确定有附红细胞体感染者为 阳性，并记录其感染率。将抗凝血川PBS按1：1的比例混合，以2000r／min离心10min， 连续洗涤3次，弃上消，沉淀加入阿氏液悬浮，4。C冰箱保存备朋。 1．2感染材料 无菌采取健康猪的抗凝血，制成鲜血压片和血涂片，姬姆萨、瑞氏染色镜检，确定无附 一34l。 猪传染病 红细胞体感染者为阴性。将附红细胞体阴性抗凝血用PBS按l：1的比例混合，以2000r／min 离心10rain，连续洗涤3次，弃上清，沉淀加入阿氏液悬浮，4C冰箱保存备用。 1．3完全培养基 将RPMI．1640、MEM、M．199按说明书分别配制成基础培养基。将基础培养基与小牛 血清按3：2的比例混合，并加入10ml／