用表达谱芯片的研究施普睿达抗肿瘤作用机制.pdfVIP

TraditionalandHerbal 中革菊Chinese Drugs第38卷增刊2007年·171· 用表达谱芯片研究施普睿达抗肿瘤作用机制 洪 阁，沈 秀，刘培勋。，周则卫，徐文清，李松年 (中国医学科学院中国协和医科大学放射医学研究所，天津300192) 摘要：目的应用基因表达谱芯片技术研究中药有效成分施普睿达对小鼠肝癌H。：基因表达的影响。方法建立 荷Hzz肝癌的小鼠模型，用施普窖达治疗10d后，处死实验组和对照组小鼠，分别提取出肿瘤组织总RNA，用Cy3一 du TP和Cy5-duTP标记实验组和对照组肿瘤组织的mRNA；通过逆转录制成cDNA探针，与4096点的小鼠基 因表达谱芯片进行杂交和扫描。结果 实验组与对照组共有358个基因出现差异表达，经初步分析，表达差异基因 主要有肿瘤转移相关的基因、肿瘤信号转导相关的基因、细胞凋亡相关的基因、细胞周期相关的基因、肿瘤药物代 谢相关的基因、基因组稳定和DNA修复相关的基因等。结论施普睿达主要是通过调控肿瘤细胞周期进程、影响 肿瘤细胞信号转导，调节肿瘤转移和细胞凋亡相关基因的表达等多种途径抑制肿瘤的增殖和转移，表达谱芯片技 术可以快速，高通量的筛选药物作用的基因靶标，提示药物的作用机制，加快药物研发的速度。 关键词：施普睿达；抗肿瘤作用机制；基因芯片 施普睿达(SPRIDA)是以中药苦豆子中提取照组给予生理盐水(o．3mL／d)。药物临用前以注 分离的生物碱SRI为原料，经半合成精制而成的生 d。于第11天处 射用水配制，ip给药，连续给药10 物碱类衍生物。本课题组近几年来开展了施普睿达 死小鼠，摘取肿瘤组织，RNase—free的生理盐水漂 抗小鼠移植性肿瘤作用的研究，其对肝癌H。。抑瘤 洗样本，铝箔包裹，迅速液氮冻存备用。 率为79．3％(Po．001)，对宫颈癌U。。为74．3％2．2总RNA的抽提及纯化：取冻存的实验组(10 (P0．01)，对肉瘤S18。为73．9％(P0．001)，对只)和对照组(10只)肿瘤组织，按组别用组织匀 乳腺癌为57．1％(P0．01)，对淋巴瘤为53．5％浆机分别混合均匀，用UNIzol试剂抽提肿瘤组织 (PO．01)[1’23；本实验应用基因芯片技术对施普睿 mRNA 达治疗前后肿瘤组织基因表达谱的变化进行了研 Midi试剂盒纯化mRNA。 究，以期鉴定出差异表达基因，并从分子生物学水平 2．3探针标记：参照文献方法逆转录标记cDNA 探讨其药效作用的物质基础及抗肿瘤作用机制。 1材料 1．1药物：施普睿达，白色固体粉末，在水中极易溶 mRNA，经乙醇沉淀后溶解在5×SSC(标准枸橼酸 解，极具引湿性，经HPLC检测质量分数大于盐水)+0．2％SDS(十二烷基硫酸钠)杂交液中。 96％，由本课题组自制。 2．4芯片杂交与荧光扫描：在暗室条件下，将基因 rain 1．2瘤种：小鼠肝癌H：：瘤株，购于天津市医药科 芯片和杂交探针分别在95℃水溶液中变性5 学研究所。 后，将基因芯片置于杂交探针上，用盖玻片覆盖，置 1．3 h。然 于杂交舱中，用Parafilm密封，60℃杂交16 动物：昆明种小鼠，体重(20土2)g，6～8周 龄，雌雄各半，购于中国医学科学院实验动物研究 所，动物许可证号SCXK京2004--0001。0．1％x 1．4基因芯片：小鼠基因表达谱芯片及芯片标记杂 rain，室温晾干。用ScanArra