银杏叶提取物对核因子-κB转录通路干预作用地研究.pdfVIP

广东省药学会学术年会论文集——大会报告 银杏叶提取物对核因子一1血转录通路 干预作用的研究 李国豪1。雷秀霞1，衣艳梅2，徐邦牢1，周小棉1，王浩平’。杜￥2 (1．广州市第一人民医院，广州510180；2中山大学药学院微生物与生化制药实验室，广州510080； ’．广东省人民政府机关门诊部，广州510180) 喘中部分可能的分子机理。方法 以HL-60细胞作为工具细胞，分别经TNF0【、GbE刺激，转染带有报告基因的质粒 干扰其它途径或采用其它方式来实现的。 关奠诃：银杏叶提取物；哮喘；核因子一KB；肿瘤坏死因子；HL-fi0细胞 许多因素可诱发哮喘的发作，包括病毒感染、细菌脂多糖、氧化刺激及炎症介质等，它们通过细胞内信号转导 通路刺激多种细胞因子、趋化因子、黏附分子及酶的基因表达，其中肿瘤坏死因子a(TNF0【)是一种由多种细胞产 生的具有广泛生物学活性的前炎症细胞因子，是哮喘发病过程中的重要因素。在信号转导过程中，核转录因子 NF—KB(Nuclearfactor-KB)起着关键性的作用。研究证实，在人及动物模型中，哮喘性炎症与肺细胞中NF—I出的活 针对Il(1【／NF—KB的激活和抑制，从不同环节寻找药物用于防治哮喘是抗哮喘药物研究的一个新靶点，因而具有广阔 的研究前景。 我国药典中记载银杏叶有润肺、平喘、止痛，用于肺虚咳嗽。国内外有学者以GbE来治疗哮喘大鼠，发现GbE 可减轻嗜酸性粒细胞(EOS)在呼吸道局部的聚集从而减轻了哮喘症状，相关的研究也证实GbE对缓解哮喘确有成效。 }IL一60细胞是早幼粒白血病细胞，具有嗜酸性粒细胞的特性，以及向嗜酸性粒细胞分化的潜能，因此，HL一60细胞是 模拟体内嗜酸性粒细胞生物功能的理想工具细胞。本研究拟通过探讨GbE对HL一60细胞NF-KB转录通路的作用，解 析GbE在哮喘治疗中的作用机理。 1材料和方法 1．1药品和试剂 舒血宁注射液由万荣三九药业有限公司提供：重组改构的人肿瘤坏死因子由上海赛达生物有限公司提供；IKBa 一抗由CellSignaling公司提供；羊抗兔二抗及DAB显色剂由武汉博士德生物工程有限公司提供；荧光素酶检测试 ．25． 蛆，单独Thl：q刺激组和TNF 1．3免疫印迹：mFa单独自0擞目：“L60细胞培养过直，加TNFq1×104或4X104单位，经5minI钿】n 3‰m 2 G比加入细脆培养液巾lob后加r陋15×104刺擞，于30min目收集细胞r经加^吉有蛋自酶抻制剂的细胞裂解 P踮．1％gP EDTA．0 涟(10ug／ml 40，lmol／L 5％Ⅸ氧月H酸钠，0 上清移{新的盱管，量自椅测试剂盘定量。挂测定的蛋白浓度．取20ug待耐样8与5倍L样缓冲涟按№Ⅷ％☆， 100℃加热5min变性。在l吣聚丙烯酰齄凝腔±进行SDSP／*GE电诛。电诛完毕进行湿式电转于PVDF膜，室温封闭 1 5小时． EEL麓光涟曝光。 1 4萤光囊酶扦析 *养HL一60细胞待细胞密度选刊7080％时．使用Ⅱ荧光寨酶活性分析系统，自参照PEF—RL统转染结果，质粒 12小时后再加T盯q刺激，8小时后收集样品，按月Promega公目提供的报告检测系统标准操作方案榆测细胞裂解 物巾荧№幂酶∞活性，荧光素酶活性可直接反跌肝一lcB棱融活的程度。 1 5统计学分析 数据之间使用方差分析厦q检验进行分析。 2结果 2 1 TNF吨单独刺敲塑：我m观察TTN卜a刺激HL{0细胞月IK陆活性变化的免疫印迹检测结果．发现伸卜咖 的TN卜a均能有效地澈活乩10细胞中NFl．B／1r．Ba转最通路。 _rNFq 4 1 0 4 4 4(1x10U) Hm b=!—=剑 ·一臣!三三至jj刁圈 脚b!!!!!!!!!剑 O 50 30 3015 5 frain) 田 免疰印谴妆