咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织白细胞介素-5mRNA表达的影响_临床医学论文.docVIP

咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织白细胞介素-5mRNA表达的影响_临床医学论文 咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织白细胞介素-5mRNA表达的影响_临床医学论文 作者：杨牧祥,于文涛,徐华洲,王晓红 【摘要】 目的 观察咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织白细胞介素-5(IL-5)mRNA表达的影响。方法 40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、咳喘宁高剂量组(27 g原药材/kg体重)、咳喘宁低剂量组(13.5 g原药材/kg体重)、桂龙咳喘宁对照组(0.41 g/kg体重),每组8只。除正常组外,以卵蛋白致敏并吸入激发法制备大鼠支气管哮喘模型,各治疗组均从第1次哮喘激发开始(造模第3周)至处死前每日灌胃给药,激发并给药4周后处死大鼠。采用RT-PCR检测IL-5mRNA表达,采用HE染色观察肺和气管病理组织学变化。结果 与正常组比较,模型组大鼠支气管管壁和平滑肌厚度、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞数以及肺组织IL-5mRNA表达明显增加(0.01)；与模型组比较,各治疗组均可显著降低支气管管壁和平滑肌厚度、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞数以及IL-5mRNA表达(0.05或者0.01)。结论 咳喘宁可降低肺组织IL-5mRNA的表达,抑制嗜酸性粒细胞在气道的浸润、聚集和活化,减轻哮喘气道炎症。 【关键词】 咳喘宁；支气管哮喘；白细胞介素-5；大鼠 Key words：Kechuanning；bronchial asthma；IL-5；rat 支气管哮喘是由嗜酸性粒细胞(EOS)、肥大细胞和淋巴细胞等多种炎症细胞参与,白细胞介素-5(IL-5)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等多种细胞因子介导的慢性气道炎症[1]。咳喘宁为课题组经多年临床观察筛选的效方,为进一步阐明其作用机制,笔者观察了该药对支气管哮喘大鼠肺组织IL-5mRNA表达和病理组织学的影响,现报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 清洁级SD大鼠40只,雌雄各半,体重180～200 g,华中科技大学同济医学院实验动物学部提供,动物合格证号：SCXK 　　1.2 药物 咳喘宁炙麻黄、炒杏仁、紫菀、款冬花、五味子、炙百部、地龙、炙黄芪、太子参、桃仁、丹参等组成,使用前水煎分别浓缩成含量为2.7 g原药材/mL(高剂量组)和1.35 g原材药/mL(低剂量组)的混悬液。桂龙咳喘宁胶囊：山西桂龙医药有限公司生产,批准文号：国药准字批号050706,0.3 g/粒,使用前用生理盐水溶解成浓度为0.041 g/mL的混悬液。 　　1.3 试剂及仪器 卵蛋白：美国Sigma公司生产；氢氧化铝：天津市化学试剂三厂生产,分析纯；Trizol：Invitrogen公司；DEPC：美国Sigma公司；DNA Marker：TaKaRa公司；RT、PCR反应体系：北京塞百盛基因技术有限公司。主要仪器：美国PE9600型PCR扩增仪、北京六一电泳仪及电泳槽、法国BIO-PROFIF凝胶图像分析系统、北京鼎国紫外透射仪、彩云JWC-201D型超声物化器、TP1020徕卡生物组织自动脱水机、EG1140徕卡石蜡包埋机、RM2050石蜡切片机等。 　　1.4 分组及给药 动物随机分为正常组、模型组、咳喘宁高剂量组(高剂量组)、咳喘宁低剂量组(低剂量组)、桂龙咳喘宁胶囊对照组(桂龙咳喘宁组),每组8只。各治疗组均从第1次哮喘激发开始(造模第3周)至处死前每日灌胃给药,剂量见表1,正常组、模型组予0.5%的羧甲基纤维素钠液灌胃,每日1次,连续4周。 　　1.5 造模 参考文献[2]方法,除正常组外,各组大鼠腹腔内注射10%卵蛋白和10%氢氧化铝混合液1 mL,致敏后第15日用1%卵蛋白喷雾激发大鼠哮喘发作,隔日1次,每次20 min,共激发4周。以大鼠出现呼吸加快、口唇发绀、腹肌痉挛、点头呼吸及站立不稳等表现为激发成功。正常对照组以生理盐水代替卵蛋白进行腹腔注射及雾化吸入。 　　1.6 检测指标及方法 动物麻醉完全后,取右肺中叶,4%多聚甲醛固定,脱水、包埋、切片,分别做HE染色；取右肺近肺门处约100 mg,放入Eppendorf管,投入液氮罐,采用RT-PCR检测IL-5mRNA表达。 　　1.6.1 HE染色 　　光镜下观察HE染色,并参照文献[3]测量大鼠气道壁的面积,并对气管内周长进行标准化。采用NYD1000型图像分析软件测定完整支气管管腔的内周长(Pi)、管壁面积(WA)、支气管平滑肌的面积,用Pi进行标准化,分别以WA/Pi、支气管平滑肌的面积/Pi表示支气管管壁厚度、支气管平滑肌厚度；同时测定每高倍视野(400倍)的EOS、淋巴细胞数。 　　1.6.2 RT-PCR检测IL-5mRNA表达 　　1.6.2.1 总RNA的提取 　　取肺组织50～100 mg,放入匀浆器内,