SERS标记免疫金溶胶的制备及抗体和基底间的作用研究.pdfVIP

大环化学和超分子化学研究进展 贵阳 SERS标记免疫金溶胶的制备及抗体与 基底间的作用研究 仇立群蒋芸义李淑瑾顾仁敖’ 苏州大学化学系 苏州 215006 金纳米粒子标记革抗小鼠19G，制得的SERS标记抗体可用来探测IgG分子与银表面间的卡日互作用。』 关键词表曲增强拉曼光谱金纳米粒子羊抗小鼠lgG L／L， × 标记免疫分析将多种标记示踪技术的高度灵敏性和医学免疫抗原抗体反应的高度特异性相结 合，具有极良好的微量分析效果。这一一分析方法不仅灵敏度高，重复性好，准确性高，而且操作 简单，易于商品化和自动化。已有的标记免疫分析包括放射免疫分析、酶免疫分析、化学发光免 疫分析、荧光免疫分析。其中荧光分析以其无污染性及高灵敏度等特点而被广泛应用“’。 传统的拉曼散射光谱信号较弱，作为信息读出手段往往缺乏高灵敏性。表面增强拉曼光谱 (SERS)可使信号增强6～10个数量级，它的发现和发展为拉曼光谱的研究应用注入了新的活力。 激光拉曼光谱作为一种分子分析技术曾由于荧光干扰而在生物研究中受到很大限制，但红外激发光 的傅立叶变换拉曼光谱仪的出现较好地解决了这一一问题。如今，SERS已被大量应用于生物医学研 o 究各方面。同时，随着纳米粒子合成技术的发展，纳米粒子用于生物分子标记已成为研究热点／21 我们以苯硫酚为标记分子，与金溶胶结台，通过控制溶胶粒径，制得了具有强SERS信号的标 记金溶胶，然后与羊抗小鼠IgG结合，获得了SERS标记免疫金溶胶。并借助抗体上标记金纳米粒 子所带的SERS信号和扫描电镜图研究抗体分子与光滑银基底间的作用。 1．金溶胶粒径的控制及标记免疫溶胶SERS信号的获得 在实验中，我们发现，当粒径较小时，金溶胶上不能得到明显的FT．SERS信号，但当溶胶粒径 中会溶胶均采用50nm金溶胶141。通过电镜图的观测，我们发现用这种溶胶最终制得的标记免疫溶 胶具有很好的分散性。 在以前的实验中我们发现，在带有苯硫酚的SERS标记溶胶中加入羊抗小鼠IgG后，金溶胶粒 子问的距离明显增大。这是由于包裹在金溶胶粒了外的大分子蛋白质带电基团增加了颗粒的相互 斥力。FT．Raman光谱图显示抗体分子与金溶胶结合后，对标记金溶胶的SERS信号不产生影响。 2．羊抗小鼠IgG分子与银基底作用 将光滑银片浸于带有苯硫酚的标记溶胶中一段时间，用j三次水冲洗吹干后进行拉曼检测。出现 苯硫酚的SERS信号(图2(a))，说明标记免疫溶胶可吸附于光滑银表面。肉眼可以发现原先光亮的 银表面隐隐的有一层均匀的紫红色。扫描电镜显示标记免疫溶胶粒子在银表面分布较为均匀，覆盖 度也较大。所以可以认为，标记免疫溶胶主要是吸附而非沉积于表面。 溶胶粒子通过抗体分子吸附于银表面的作用机理有两种可能：1)疏水作片j；2)抗体分子中 含有s，通过s一觚键将整个溶胶连于银表面。抗体分子在Ag表面的这种吸附对于标记免疫检测 是非常不利的。因在固相抗体一抗原一标记抗体的夹心复合物中，准确的检测结果的获得要求三 314 仇立群等：SERS标记免疫金溶胶的制备及抗体与基底问的作用研究 部分的连接完全是通过抗原与抗体间的特性吸附。但从上述实验中可见，抗体分子可直接连至基 底银表面．且由于抗原小鼠IgG与抗体分子具有相似的结构，所以抗原也很有可能会这样直接吸 附至基底。 图1用苯硫酚标记的金溶胶的表面增强拉曼光 图2在经过珂i蚓处理的银表面所得到的表面 谱；(a)溶胶颗粒为30rim；(b)溶胶颗粒为50nm 增强拉曼光谱：(a)银上直接吸附苯硫酚标记免 疫溶胶；(b)用BSA处理后在吸附苯硫酚标记的 免疫溶胶 小牛血清白蛋白(BSA)在标记免疫检测中常被用于封闭基底活性位，减少非特性吸