人参皂苷组分GPT对K562白血病细胞的抑制与增加化疗药敏感性的研究.pdfVIP

调基因均主要分布在受体及其相关的基因、转录调控因子基因、细胞内信号传递介导蛋白类基因。 其中包括G-蛋白偶联的受体及其结合蛋白、锌指蛋白、肿瘤抑制基因p53结合蛋白等。结论： PND是人参总皂甙中促进造血的有效成分，不但作用于造血祖细胞。而且具有诱导巨核细胞系 CHRF-289和Meg-01细胞分化的效应。 人参皂苷组分GPT对K562白血病细胞的抑制及 增加化疗药敏感-|生的研究 浙江中医学院附属医院 浙江省中西医结合血液病研究所 金锦梅徐卫红马珂牛泱平高瑞兰 摘要 目的：探讨人参皂苷组分GPT对K562白血病细胞生长的影响，及对化疗药敏感性 的协同作用。方法：在液体培养、半固体集落形成培养中，毗不同浓度的GPT处理K562细胞 GPT对化疗药物的济同性。结果：低浓度(10¨∥ml、20u∥m1)的GPT能够显著地刺激K562 细胞增殖，中浓度(50Ⅱg／m1)时使细胞增殖受抑，并呈时间．效应依赖性，GPT分别与化疗药 为88．4-2_2．7％和73 细胞具有刺激增殖和抑制生长的双相效应，并能增强K562细胞对化疗药物的敏感性，是人参皂 苷内抑制白血病细胞的有效成分，可为临床应用提供依据。 近年来人参及其皂苷的抗肿瘤作用研究表明对肿瘤细胞的生长有抑制作用与化疗药物联用 时能提高白血病细胞对化疗药物的敏感性，并能在体外诱导白血病细胞分化。我们以前提取的人 参总皂苷对白血前祖细胞具有双向作用，在低浓度(5-25“g／m1)时通过刺激白血病祖细胞增殖 而增加了对化疗药物的敏感性，中浓度(50I．t g／m1)抑制白血病祖细胞．但仍促进正常细胞祖细 胞生长。由于人参总皂苷的成分还较复杂，故本文从总皂苷中进一步提纯出人参皂苷组分GPT， 以自血病细胞株K562为靶细胞，观察QPT对白血瘸祖细胞生长影响．及与化疗药物敏感性的 关系，从而探讨人参皂苷中抗白血病的有效部分，为临床应用提供实验依据。 1材料与方法 1．I细胞株培养K562细胞株购自中科院上海细胞所。常规接种于含10％灭活小牛血清、青 每2-3d换液。 1．2 GPT工作液GPT粉剂由本院中药研究室从人参总皂苷中提取纯化，纯度为75．8％，配 成lmgtml的工作液，无菌过滤，4C保存备用。 矾 1．3化疗药物化疗药物选择临床常用的高三尖杉酯硷(HHr)、阿糖胞苷(Ara-c)、和足叶 乙甙(Vp·16)，药物终浓度参照本室过去的报道，并经预实验筛选出恰当浓度用于实验，分别为 HHr0．05u 2．75u 2．5u g／ml、Ara--cg／ml、1唧16 g／ml作MMT法药敏测定用。每次实验前新鲜 配制。 1．4 u 养瓶内．加入GPT工作液共同孵育，终浓度分别为lOⅡg／ml、20i．tglml(低浓度)、560 g／ml u (中浓度)、100 温箱中悬浮培养．作用时间为24h、48h、72h，倒置显微镜下观察细胞生长情况，检测GPT对 细胞生长和集落形成的作用。 1．5 GPT对K562细胞生长的影响细胞经不同浓度的GPT作用不同时间后，用O．4％台盼 兰拒染法计数活细胞数，绘制细胞生长曲线。用细胞离一Ii,涂片机制作涂片，经瑞氏一吉姆萨染色， 油镜下观察细胞形态。 1．6 青毒素、链霉素为100 细胞)。 1．7 MTT法检测GPT与化疗药物的联合作用按本室已报道的方法，试验设四组：GPT 10 组(GPT u∥rrtl)、化疗药物组、GPT联合化疗药物组、无GPT为空白对照组。取对数生长期 x 的K562悬浮细胞，用IMDM调整其浓度为110。／ml。加入96平底培养扳中，100ml／?L。分别 u 加入GPTlotal／,zL，化疗药物10l／孔。GPT联合化疗组加入GPT与化疗药物各10uU孔，每组 150uI，孑L终止反应，微量振荡器上振荡10rain，