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电化学生物传感器测定DNA特定序列和含量的研究‘ 彭图治 (浙江大学化学系西溪校区杭州310028) 关键词生物传感器DNA电化学检测 1概述 随着核酸电化学研究的深入，以及电子技术的迅速发展．人们对结合了生物杂交特异性和 电化学技术灵敏、简单特点的电化学DNA生物传感器寄以极大的期望。目前．根据杂交前后DNA 导电性差别，电流密度变化，以及引入电活性物质进行标记的传感器已有报道。本文研究了一种 能够有效地将ssDNA固化在电极表面的方法．合成了一种高度电活性嵌合物作为杂交指示剂， 并在此基础上提出了一种以化学修饰电极为基础的电流式传感器，用于快速检测DNA序列和含 量。传感器以人工合成的DNA片段作为探针分子．该探针分子修饰在己吸附有导电高分子化合 物硫酚乙酸琥珀酰亚胺酯(TAPD)的金电极或喷金塑片上，当探针分子和样品中与之互补的DNA 分子杂交后，电活性嵌合物二吡啶并吩嗪二酰亚胺双二茂铁∞DI甲z)插入双螺旋的碱基对之中， 使传感器在电位扫描过程中产生电流信号，该信号对DNA含量有线性响应．。对爱滋病和结核杆 菌特征碱基序列的测试研究表明，该传感器有望用于DNA芯片诊断技术。 (Fe-DPPZ) 2结果与诩论 TAFD分子的硫酚基团与金有强烈的亲合力，借此可将该分子从溶液中吸附至电极表面，另 一方面。分子中的琥珀酰亚胺基团位于硫原子的间位，因此，吸附的TAPE)分子在金表面形成 排列有序的单分子层。TAPD分子中的琥珀酰亚胺基团极易与氨基反应，能够在常温下被客体化 台物中的氨基取代，使主、客化合物交联。本研究利用TAPD这一反应特性，将在5。端带有氨 基的ssDNA线性联结在电极表面，用于检测与之互补的DNA分子。无论是ssDNA电极．或是 经过杂交反应后的dsDNA电极，未经Fc-DPPZ溶液处理，在电化学测定中都没有电流信号。当 电极与cDNA杂交后，经FcDPPZ溶液处理．则在循环伏安图上显示出明显的氧化电流．。 ’国家自然科学基金和浙江省自然科学基金资助项目。 679 舟析化学的成就与挑战 上与互补链反应的研究，发现反应时间低手20 mill时(60℃)，所测得的电化学信号较低：反 应时间大于10 min后．信号趋于饱和，表明此时电极表面∞研临的杂交已大部分完成，因此 实验中选择的反应时间为30 min。反应温度对杂交过程的影响较为复杂，当温度低时，杂交过 程很慢，甚至不能进行；但温度过高，又会导致dsDNA热变性；此外，反应温度还与DNA本 身碱基结构有关。在本实验中，反应温度低于40℃时，几乎不能测得电化学信号；40℃～80℃ 范围中，信号增加；当温度高于80℃后，信号出现下降趋势。 在2)410。tool几～10X10。7 tool，L范围内，电流信号与浓度曲线呈线性，其斜率为 128 nAil0-7mol／L，相关系数为0．992。根据最低检测信号等于3倍噪音信号计算，该电极的检测 下限为5×10-8mol／L。对6X10-7mol／LeDNA进行了连续5次授犍，变动系数为11％。人工合 U5LTR DNA 成与爱滋病病毒和结核杆菌特征序列(HIV-I DNA片段和MTBDR片段)互补的 ssDNA片段作为探针．修饰在电极上，在样品溶液孵育和嵌合后进行电位扫描，产生了明显的 氧化电流信号。 with叠n bio∞nsor Instantdetection DNA electrochemical ofsequence-specific TazJIj Peng 310028)