血啉甲醚在血管内皮与平滑肌细胞中吸收特性的研究.pdfVIP

治。 血啉甲醚在血管内皮和平滑肌细胞中 吸收特性的研究 中国人民解放军总医院激光科 富秋涛 顾瑛刘凡光 司晋红 陆亚彬 刘爱琴 耳 的：光动力疗法(Photodynamictherapy，PDT)是一种治疗恶性肿瘤的有效方法，近来 已应用于良性疾病的防治。血卟啉单甲醚(HMME)作为国家新型光敏剂已用于临床治疗肿瘤 和鲜红斑痣，并将可能在血管成形术后再狭窄防治中得到应用。PDT治疗鲜红斑痣的靶组织 是毛细血管内皮细胞(Ec)．治疗再狭窄的靶组织是血管平滑肌细胞(SMC)。但目前尚缺乏对 该药在EC和SMC吸收特性的了解。本研究以体外培养的人脐静脉EC、兔主动脉SMC，分别 用显微荧光强度图象分析法和荧光分光光度法研究血啉甲醚在其中的吸收规律，旨在初步了 解血啉甲醚在EC和SMC中的吸收量与孵育浓度和时间的关系。 方法：用酶溶法培养人脐静脉EC：采用ABC免疫组化方法检测EC特异性抗原一人第 垤因子是鉴定EC：贴块法培养兔主动脉SMC；电镜下观察SMC胞浆内特征性的肌丝及密体 度分别是20、40、60、80、100ug／mt。在分别孵育即刻、1 荧光强度图象分析法和荧光分光光度法测定细胞内光敏荆含量，分析孵育浓度、时间对其吸收 量的影响。 结果：两种测定方法所得结果的趋势基本一致，EC、SMC对HMME的吸收呈浓度、时 间依赖性。EC对其吸收较快，30分钟时即达吸收峰值的89“，120分钟时已接近峰值。而 SMC吸收相对缓慢，但在高浓度、长时间孵育时对光敏荆的吸收显著增强，30分钟时吸收仅 180、240分钟时，SMC对HMME吸收量均显著大于EC(P0．05)。 讨论：本研究采用显微荧光强度图象分析和荧光分光光度二种方法测定细胞内HMME 含量。旨在综合、客观地测定细胞内光敏荆含量。两种方法所得结果的趋势是一致的。从吸收 曲线看出：EC、SMC对HMME的吸收均与孵育浓度和时间呈正相关。但两细胞各有特点，(1) 在60分钟以内，EC吸收量大于SMC．说明EC吸收较快。显微荧光强度图象分析法示30分钟 时．SMC的吸收量明显多于EC。虽然两种方法所得结果在个别浓度和时同点上有所不同，但 这是因为各方法本身特点所致。 一47 两细胞对HMME的摄取特点明显不同。原因可能为，光敏剂进入细胞不简单是一个自由 渗透的过程。每种细胞对其有不同的吸收、排出的规律，这可能与细跑表面积、体积及光敏剂对 细胞的结合位点有关。Ec为旃平多角形，虽体积小，但表面积较大，因而吸收光敏剂快，但总 量不高。而SMC呈梭形，体积较大，约为EC的2倍，因此会有吸收慢、吸收总量高的特性。另 据认为较易进入细胞的疏水性血卟啉分子除结合于细胞膜，还结合于线粒体、内质网、溶酶体 等部位。而两种细胞的膜和内部亚徽结构方面的差异，也可能是造成吸收光敏剂各有特点的原 因。但详细机理尚不清楚。 本研究结果提示，应用HMME作为光敏剂的PD口、方法，能在EC和SMC间产生较好的 选择性光敏效应，这样有益于血管成形术后再狭窄的防治。 结论：EC、SMC均可吸收HMME，其吸收量与给药呈正相关。EC吸收的速度较快，而 SMC吸收能力在HMME，孵育时间长于60分钟时大于EC。 _：_to∥P，f…“0)血卟啉单甲醚体外光敏效应观察 中国人民解放军总医院激光科 富秋涛 顾瑛刘凡光孑J|、业勤 且 称化学发光法)，可闻接测定HpD经照光产生的单态氯(’0。)和其他活性氧物质(ROS)．是检 测HpD光敏反应的灵敏方法。HpD作为第一代光敏剂，临床应用已积累了一些经验，血卟啉 单甲醚(HMME)是新型国产光敏荆．已成功地用手临床治疗，但目前尚缺乏对该药物体外光 较，同时观察发光强度与HMME浓度、激光照射功率密度、照射时间、激光波长的关系。 方法；甩化学发光仪测定．测定管为高55ram，内径为10ram的硬质塑料试管。分别在管 0．4ml和