刀鲚精子超低温冷冻保存技术的研究.pdfVIP

第 36卷第 1期 水 产 养 殖 Vo1-36，NO．1 2015年 1月 1日 JournalofAquaculture Jan．1，2015 doi：10．3969~．issn．1004-2091．2015．01．008 繁 i 薰 丁淑燕 一，李跃华 ，黄亚红z，许志强 ，葛家春 (1．江苏省淡水水产研究所，江苏 南京 210017；2．南京大学生命科学学院，江苏 南京 210093) 摘 要：本文对刀鲚精子的超低温冷冻保存技术进行 了研究。以解冻后精子的运动力为参数，分别探讨了不同的稀释液、 不同种类不同浓度的保护剂、不同的平衡时间以及不同的稀释 比例对刀鲚精子进行超低温冷冻保存的保护效果。结果显示：采 用D一15稀释液，将精液和稀释液按 1：2稀释，4℃平衡 20min，加入 10％DMSO，混匀后液氮面上方6cm处平衡 10min，接着 在液氮面上平衡5min，最后投入液氮中保存，一周后，液氮蒸气中平衡5min，37℃水浴解冻，活力效果最佳，达 70％左右。 关键词：刀鲚；精子；超低温保存 中图分类号：Q173 文献标识码：A 文章编号：1004—2091(2014)10—0032—03 刀鲚 (Coiliaectenes)，又名长颌鲚 ，与七丝鲚 、 1．1实验材料 短颌鲚、凤鲚在水产市场上统称为凤尾鱼。以其肉 本研究中刀鲚样品形态正常、生长 良好 、无疾 质细嫩、鲜肥、时令性强而著名，是长江中下游主要 病 、达到性成熟 ，于洄游期间采 自长江南京段潜州 经济鱼类之一。长江 口曾是我国刀鲚最大的河 口渔 江段 ，因刀鲚 出水即死，所以离水就要解剖取精巢 场，20世纪70年代长江下游刀鲚最高产量达3945 采集精子。 t，后来 由于高强度捕捞 、航道建设和水质污染等原 1．2 精液的采集 因，刀鲚 自然资源逐年减少，已不能形成鱼汛，资源 解剖取精巢于4℃冰箱中预冷的干净研钵中 每况愈下，已到了岌岌可危的地步[1-2]，因此保护刀 剪碎。所采集的精液要求乳 白色 ，无血污、粪便污 鲚种质资源、防止物种灭绝势在必行。 染。先用细 口吸管吸一滴水于载玻片上，对准视野， 超低温保存是一种有效的，并能长期保存鲜精 然后用针尖挑取上述精液立即于显微镜下边搅匀 的方法 。迄今为止约有 200多种海淡水鱼类被用于 边观察其活力，大于80％者用于冷冻保存。 超低温保存研究 ，而关于刀鲚精子的超低温保存 1．3 精子冷冻 研究却鲜有报道，本文就刀鲚精液超低温冷冻保存 将精液与稀释液按一定比例混合，4℃平衡后， 进行研究，拟建立一套刀鲚超低温冷冻保存方法， 轻微吸打，取上清液与含有保护剂的同种稀释液等 以期为刀鲚繁殖生物学、遗传育种 、种质资源保护 体积混合，分装 ，接着进行冷冻。冷冻方法：首先在 等提供技术支持。 液氮面上方 6cm处平衡 10min，接着在液氮面上 l 材料 与方法 平衡 5min，最后投入液氮中。 资助项 目：江苏省科研院所社会公益研究与服务专项(BM2004718，BM2006703)；江苏省水产j项T程项 目(K2006—3) 作者简介 ：丁淑燕 ，(1978一)，女，助研，研究方向：淡水水生生物精子超低温冷冻保存技术．E—mail：dshy7869@sina．corn 第 1期 丁淑燕，等 刀鲚精子超低温冷冻保存技术的研究 33 刀鲚精子冷冻保存研究中，比较了不同稀释液 高达 65％左右，结果见表