奶牛血浆蛋白质组学研究中双向凝胶电泳条件的优化.pdfVIP

中国雇亏c薹搪 2009，25(20)：30—34 ChineseAgriculturalScienceBulletin 奶牛血浆蛋白质组学研究中双向凝胶 电泳条件的优化 牛丽莉，魏彩虹，李宏滨，杜立新 (中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193) 摘 要：研【究 目的】血浆蛋白组成复杂、信息含量丰富。血浆蛋白质结构和数量的改变，对疾病诊断和治 疗具有重要的意义；【方法】双向电泳技术是蛋白质组研究中比较常用的一种蛋白质分离技术。根据血 浆蛋白动态范围大，高丰度蛋白对分析存在干扰的特点，设计了两种实验方案，并比较了这两种方案的 优缺点，为血浆作为奶牛疾病诊断标记的应用提供参考；【结果】使用热SDS法处理样品可分离出230个 可以重复的蛋 白点。AurumA 一GelBlueM columns除白蛋 白柱处理样 品分离了156个可重复的蛋 白点；【结论】热SDS法处理血浆样品联合pH4～7的IPG胶条的方案，步骤简单，分离效果好。 关键词：奶牛血浆；蛋 白质组；双向凝胶 电泳 中图分类号：$852．33 文献标识码 ：A 论文编号：2009—0594 OptimizationonTwo-dimensionalElectrophoresisforPlasmaProteomicStudyinDairyCow NiuLili，W eiCaihong，LiHongbin，DuLixin (InstituteofAnimalScience,ChineseAcademyofAgriculturalSciences(CAAS)，Beijing100193) Abstract：[OBJECTIVE]Theeomponentofplasmaiscomplexandplasmaproteinpresentinformation—rich． Thechangeofstructurenadquantityofplasmaproteinisveryimportantfordiseasediagnosisandtreatment． However，thelargedynamicrnageofproteins，high—abundantproteins，excessofsaltna dlipidinplasmamakes thenaalysisvery challenging．Soitisimperativetoimprovetheabilitytoanalyzetheproteomeofplasmaunder awidevarietyofphysiologicalconditions．[METHOD]Thisstudyexaminedtheeffectsofvariouscombinations ofdepletionhighabundantprotein，Hot-SDStreatmentnadIPG stripswithdifferentpH on2-DEmapofrbo— vineplasma．[RESULTS]230proteinpointsweresepraatedwhichappearedinthreerepeat—gelsbyHot—SDS methodand156proteinpointswereseparatedbyAuurmA佑一Ge1BlueMinicolumnsmethod．[CONCLUSIONI Theheatingwith10％SDSnad2．3％ DTItodenaturesampleat95~Cfor5min．andIEFonpH4-7IPG strips (17cm)pH4—7IPGstripwereusedwasbetterraerecommendedofrbovineplasmaproteomeanalysison2-DE bysilverstaining，whichcaneffectivelyimprovetheresolutionandintensityoflow-abundantproteins．The