芽胞杆菌抑菌物质及其在畜牧生产中应用.pdfVIP

第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集 立的间接免疫荧光法检测和试剂盒法检测土拉菌的检测情况详见表 1，结果显示，所建立的间接免疫 荧光法和试剂盒法检出土拉菌阳性检出率无显著差异。 表1 建立的间接免疫荧光法和试剂盒法检测土拉弗朗西斯菌的检测情况 抗原片名称 数量（份） 间接免疫荧光法检出阳性 试剂盒法检测阳性数 数（份） （份） 样品血清 908 44 51 阴性对照 40 0 0 合计 948 44 51 3 讨论 间接免疫荧光检测最重要的就是荧光显微镜下观察，配制实验用适当浓度的伊文思兰 PBS 稀释 液稀释荧光标记二抗进行荧光染色。荧光色素一般在 20 ℃时便即开始发生猝灭现象，因此，在室温较 高的环境下观察荧光片时，应将室温保持在 20 ℃以下，以防荧光基团的猝灭。在观察荧光片时，用 5 0%甘油封片效果要好于正常封片的效果，其观察视野变得更加清晰，以达到观察的理想化。荧光显微 镜每次使用最好把时间控制在 2h 以内，如果使用时间过长，将使荧光显微镜内置超高压汞灯的亮度 发生下降，荧光效果减弱。观察结果时，如果发现长时间观察抗原片同一部位而发生荧光猝灭的现象， 可以将抗原片放置暗处，时间越长则荧光强度恢复效果越好。 一抗和二抗的工作浓度的优化及确定，一抗的特异性和间接免疫荧光染色时间的优化为本研究最 主要的三个关键控制点。将一抗效价定为 1：50，二抗的稀释倍数定为 1：:20 的实验效果最佳，可避 免非特异性荧光的干扰，保证特异性荧光便于观察；一抗的质量尤为关键；间接免疫荧光染色的最佳 时间是一抗与抗原结合的时间及二抗与一抗结合的时间均为 30 min ，因为一抗结合的时间太短时会 降低荧光强度，而二抗结合的时间过长会增高背景。 本研究利用间接免疫荧光检测方法，对 908 份样品进行检测，建立阴性对照成立，菌体形态清晰 可见，结果容易判断，而阴性样本呈现橘红色，没有特异性绿色荧光。目前土拉弗朗西斯菌检测仍以 增菌镜检、生理生化法为主，虽然特异性强，但鉴定时间长，鉴定疑似菌株大约要 3～5d，生理生化 反应也要观察 3～10d，对检验人员要求有一定的技术经验。间接免疫荧光法既可以检测抗原，也可以 检测抗体，实验过程比较简单、方便便捷，判断结果简单、易解释，具有快速、准确、特异、敏感等 优点[4-8] 。利用间接免疫荧光检测法可以同时检测大量样品，节省了很多实验操作时间。因此将其应用 于现场诊断或者样品病原前期筛选的判断，能够快速、准确的检测病原，是土拉弗朗西斯菌的流行病 学调查和防控疫病传播的有效方法。 [9-10] 目前，间接免疫荧光技术已经用于各个领域的检测研究，在国外已逐渐受到重视和应用 ，国 内尚未有土拉菌间接免疫荧光检测法应用于流行病学检测的研究报道，因此，该方法有望成为土拉菌 流行病学的快速检测手段。 参考文献（略） 芽胞杆菌抑菌物质及其在畜牧生产中的应用 1 2 魏姗姗 ，徐凤宇 （1. 吉林农业大学动物科学技术学院；2. 吉林农业大学，动物生产及产品质量安全教育部重点实验室，吉林长春， 130118） 摘 要 芽胞杆菌产生的抑菌物质活