简易-高盐沉淀法提取云南松针叶DNA的条件优化.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2014，42(15)：4564—4565，4568 责任编辑 石金友 责任校对 况玲玲 简易 一高盐沉淀法提取云南松针叶DNA的条件优化 袁晓慧，段安安 ，许玉兰 ，刘惠民 (1．西南林业大学林学院，云南昆明650224；2．北京林业大学林木育种国家工程实验室 林木花卉遗传育种教育部重点实验室，北京 100083) 摘要 [目的]优化简易一高盐沉淀法提取云南松针叶DNA的条件。[方法]采用正交试验设计，对简易一高盐沉淀法提取云南松针叶 基因组 DNA的提取条件进行优化 ，然后用浓度 1％琼脂糖凝胶 电泳检测DNA质量 ，并用微量紫外分光光度计检测DNA溶液的纯度和 浓度，以定性和定量检测为指标 ，得 出简易一高盐沉淀法提取云南松针叶基 因组 DNA的最佳处理组合。[结果]最佳处理组合为：水浴 温度为70℃， ： =25：1，离心时间为8min，NaC1浓度为2．2mol／L。[结论]该结果可为开展云南松分子生物学的研 究奠定 基础 。 关键词 云南松 (Pinusyunnanensis)；正交试验 ；简易～高盐沉淀法 中图分类号 $791．24 文献标识码 A 文章编号 o517—6611(2014)15—04564—02 Optimization ofExtractingDNA from PinusyunnanensisNeedlesbySimple-High SaltPrecit，itation YUANXiao-hui，LIUHui-minetal (ForestrySchool，SouthwestForestryUniversity，Kunming，Yunnan650224) Abstract [Objective]TooptimizeconditionsforextractingDNAfromPinusyunnanensuneedlesbysimple—highsaltprecipitation．[Meth— od]Usingorthogonaltest，theextractionconditionswereoptimized．Then，1％ofagarosegelelectrophoresiswasusedtodetectthequalityof theDNA andmicro—ultravioletspectr0ph0tometerwasusedtodetectthepurityandconcentrationoftheDNA．Thebestprocessingcombination thatextractingDNAfromP．yunnanens／sneedlesbysimple—highsaltprecipitationwasdecidedbyqualitativeandquantitativeindexes．[Re— suit]Itisconcludedthattheoptimalcombinationwereasfollows： ： 。l=25：1，NaC1concentrationis2．2moL／L，pyrolysistem— peratureis70℃andthecentrifugetimeis8min．[Conclusion]TheresuhswilllayafoundationofrfurtherresearchofP．yunnanensisinmo— lecularbiology． Keywords Pinusyunnqnensis；Orthogonaldesign；Simple—highsaltprecipitation 云南松(Pinusyunnanensis)是分布于我国西南季风影响 1．1．2 主要仪器。BeckmanAvanti一30高速冷冻离心机， 下的亚热带山地暖性气候条件下的重要树种，具有适应性 购自北京时代北利离心机厂；SynopticsGenegenius凝胶成像 强、耐干旱瘠薄以及木材用途广泛等特点 ，是我国西南特 分析仪和Bio—RadPac．300电泳仪，购 自Bio—Rad公司；微量 有种，也是组成滇黔桂亚热带山地针叶林植被的主要成分之 紫外分光光度计，购自上海元析仪器有限公司。 一 。 其面积、蓄积量分别 占云南省有林地面积、蓄积量 的 1．1．3 主要试剂。Tris和PVP，购