2.一步法ELISA在HIV初筛中的应用探讨.pdfVIP

步法检测阴性或弱阳性标本用生理盐水作1：10和 随机挑选的阴性标本进行验证。结果显示WB法检 1：100稀释后用上述ELISA一步法试剂复测HIV出阳性82例，均为一步法及二步法检测都是阳性 抗体。操作步骤和结果判断按试剂说明书进行。 82例。30例随机挑选的阴性标本WB法检测均阴 2 结果 性，表明无假阴性。 从检测结果看，一步法(1：10倍稀释)的假 2．1两种双抗原夹J心ELISA对10例确诊HIv抗体 阳性及临界质控标本检测为了解二步法、一步法 阳性率为1．82％(2／114)，二步法假阳性率为5．9％ 两种检测试剂的敏感性，我们首先对深圳市CDC (7／119)，两法均无假阴性，特异性较好。一步法 提供的临界质控及10例确诊HIV抗体阳性标本进试剂对1：10稀释样品的检测结果表明，该试剂可 行检测。结果两法临界质控均阳性(oD值分别为 检出所有临床样本。 3讨论 0．34、0．38；CO[cutoff]值分别为0．21，0．187)，表 明两法对低滴度的抗体水平具有高度的敏感性。10 HIV检测要求绝对准确可靠，无论是假阴性还 例确诊阡1性标本中，二步法检测10例均阳性；一 是假阳性都可能造成严重后果”J。初筛试验不漏检 步法检测10例中有5例阳性，弱阳性2例(0D值是其主要的要求，一般选用敏感性好、操作简便、 为0，23、O．26)，阴性3例。重复实验获得相同结果。价格便宜的酶联免疫吸附(ELIsA)试剂。目前所 2．2 阴性或弱阳性标本稀释后一步法HIV抗体复 采用的第三代ELISA试剂由于采用了重组抗原和 检一步法阴性或弱阳性5份标本用生理盐水作1： 合成肽包被反应板提高了特异性；绝大部分采用的 是双抗原夹心法的检测原理，在敏感性极大提高， 10和1：100倍稀释后再以一步法复测，结果5份 假阴性标本检测结果全为阳性，所有样本OD值明 基本上可以满足艾滋病初筛的要求。 显高于稀释前(见表1)。 在经典二步法原理的基础上，将受检标本和酶 表1 ELISA对10例确诊HIV抗体阳性及临界质控标本检标抗原一起保温反应，可做一步检测。一步法操作 测结果 简化，能够满足临床快速、简便的要求。但在测定 中，当标本受检抗体的含量很高时，过量抗体分别 和固相抗原及酶标抗原结合，减少“抗原．抗体．酶 标抗原”夹心复合物的形成，类似免疫沉淀反应中 抗体过剩的“前带现象”，此时反应后显色的吸光 值不升反降，因此抗体剂量．反应曲线到达高峰后呈 钩状弯落，这种现象又被称为钩状效应(hook effect)。钩状效应严币时，甚至町以出现假阴性结 果。因此在使用一步法试剂测定标本中较大病理学 浓度范围的蛋白时，应注意可测范围的最高值。在 抗原检测中，应用高亲和力的单克隆抗体制备此类 试剂可削弱钩状效应。 一步法和二步法ELISA各有所长和不足。面 对国内众多公司所提供的不同原理试剂，了解其检 注：二步法CO值为0．21，