大鼠心脏窦房结电镜取材定位的探讨.pdfVIP

2007 CHINESEJOURNALOFCLINICAL VOL．25NO．3 ·32· ANATOMY 准确、简便切取到组织，而在取得组织块后，如果标本 片转移到载玻片时位置反转或颠倒，也便于与图纸所 不进行定位，而随意取材，要在电镜这样非常微小范围 画的切片轮廓对应。5．半薄切片需烤干后滴加染液，且 内准确找到窦房结组织，难度较大；而定位不准则难以 染色时加热时间不宜过长，以液体不沸腾为妥，否则切 研究窦房结各部细胞的结构差别。甲苯胺蓝为生物染 片易有气泡，不利于光镜下观察。切片染色后要立刻观 色剂，能与细胞核有机地结合。在染片中，细胞浆着灰 察记录，避免在空气中暴露过久，以致组织结构模糊131。 蓝色，核呈深蓝色，能清楚地显示窦房结组织的细胞层 6．窦房结组织的确定以窦房结动脉和周围是否有结细 次与结构；P细胞及T细胞较普通心肌细胞体积细小， 胞分布为准。 ， 略弯曲，且染色胞浆色谈，排列致密，与周围组织较易 半薄切片是超薄切片技术中很有用的一种定位方 分辨。另外在研究中也发现窦房结组织的半薄切片可 法，采用这种方法克服了超薄切片的盲目性和电镜视 野的局限性，有利于在电镜下能较大视野研究细胞之 避免石蜡切片的固定不良，切片较厚(通常2um)等技 术上的一些缺陷，可以充分利用光镜的分辨率，显示出 间的正常和病理关系。我们把它引进心脏窦房结的超 石蜡切片很难或不易确定的细胞结构和亚微结构，如 微结构的研究。这种定位取材方法由于标志明显，故均 毛细血管的密度，染色体的边聚等，初步确定实验是否 能准确切取到窦房结，且工作量较传统法大为减少，所 成功，起到预实验的作用。 以可推广应用于心脏窦房结超微结构的常规检查，有 运用该法能简便、快速、准确地在包埋块上对窦房 其独特之处。 结进行定位，可在电镜下观察到完整的窦房结组织，也 【参考文献】 可对窦房结组织作连续切片来观察其超微结构。在整 【l】罗斌，宋一璇，祝家镇，等．心脏传导系统取材方法的改进川．中国 个定位过程中应注意以下几点：1．体视镜下取窦房结组 临床解剖学杂志，1998，16(3)：284—285 【2】朱茂艳、陈惠萍、杨俊伟．培养细胞凋亡的半薄与超薄切片的比较忉． 织必须准确，我们采用的是宋一旋的改良法Ⅲ；2．采取定 电子显微学报，2000，19(5)：739-742 向包埋法，对包埋块作好定位标志；3．半薄切片的厚度 [3】粱莹、甘小敏、陈若泽．电镜生物标本半薄切片定位方法【刀．广西预 以0．5～I．0“m的厚度为宜，太厚结构不清晰，细节不易 防医学111．1997,3(5)：318 分辨。4．包埋块切面左上角做一记号很重要，可防止切 (上接第25页) 其变得更加紧密，从而阻碍了脱钙液的进人速度。另外 发现每一种脱钙剂有不同的脱钙时间及脱钙效果。 研究表明，脱钙液中配加10％甲醛，可同时对组织进行 B液和C液脱钙速度较快，尤其是C液，延长二者 固定。脱钙机中加温至37。C且应用超声波，可明显加快 脱钙时间会对组织有较大的损害，且使用化学方法测 脱钙速度。 试均不能确定脱钙的终点，细胞核染色上B液好于C 总之，本研究经过反复制片观测，烧骨组织结构清 液。分析原因是二者都是强酸，N03．比Cl一的氧化能晰可见，脱钙方法稳定可靠，获得了满意的结果。在烧 力更强。D液脱钙速度相当慢且脱钙后组织会稍微