尿红细胞位相检测在肾脏疾病鉴别诊断中应用.pdfVIP

64 JModLab 现代检验医学杂志第23卷第4期2008年7月 Med。V01．23，No．4，Jul．2008 2．4蛋白样品是否与明胶酶蛋白上样缓冲液混合 工作，为在临床展开关于食管癌MMP一9和MMP一 保存对MMP一9和MMP一2活性的影响在蛋白 2的回顾性调查研究提供了便利。 样品保存方式建立过程中，我们对明胶酶蛋白上样 我们在研究食管癌中MMP一9和MMP一2表 缓冲液是否对MMP一9和MMP一2的活性造成影达时对适宜的蛋白上样量进行了相应探索，以肉眼 响进行了研究。我们将新鲜组织提取蛋白后分为两 可见清晰蛋白条带为标准，包括所有明胶酶活性形 组，一组与明胶酶蛋白上样缓冲液混合保存，另一 式，适宜的蛋白上样量为10pg，也为临床或其它研 组单独保存，然后一起用酶谱法进行检测，结果显 究者检测食管癌组织中的MMP一9和MMP一2提 示两者没有明显区别(图5)。 供了一个参考标准。 一般认为蛋白样品应该置于超低温保存，尽量 避免反复冻融，以免发生蛋白降解，保持酶的活性 的要求就更加严格了。但是根据我们的研究结果发 现，经过长期的低温保存(一20℃)和反复冻融后， MMP一9和MMP一2却不会发生降廨，而且酶的活 性依然存在。它们这种酶活性的稳定性为其在肿瘤 的浸润转移过程中发挥重要作用奠定了坚实的基 础，也为我们全面认识MMP一9和MMP一2开辟了 图5明胶酶墨自上样缓冲液对 一个新视角。 MMP一9和MMP一2的活性的影响 参考文献： westermarckJ，KahariV ofmatrix 3讨论 国内外有很多实验室都已经用各种方法 [1] M．Regulation intumor 展开金属蛋白酶在各种肿瘤中的检测，但是都局限 metalloproteinaseexpression invasion[J]． 7hPFA5E占，o“r，l口Z，1999，13(5)：781—792． 于实验室，未能广泛应用于临床检测。我们用酶谱 Cowland N．Molecularcharacteriza— [2] JB，Borregaard 法对提取的食管癌组织蛋白进行了蛋白上样量梯 tionand oftissue ofthe for pattern expressiongene fromhu— 度检测，发现在对组织进行MMP一9和MMP一2活neutrophilgelatinase—associatedlipocalin 性检测时所需的蛋白量很少，只需10弘g，从而对微 mans[J]．(昆ni胍胁，1997，45(